[發明專利]一種夾心型肺癌標志物電化學傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201810217455.7
• 申請日: 2018-03-16
• 公開（公告）號: CN108469461B
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 李月云;呂慧;張曉波;張春燕;張栓;王平;董云會
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30;G01N33/574
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本發明屬于免疫分析和生物傳感技術領域，提供了一種夾心型肺癌標志物電化學傳感器的制備方法及應用。本發明利用核殼結構的雙金屬納米材料Au@Pt功能化氮摻雜的石墨烯負載Cu²⁺作為催化材料，與檢測抗體孵化后作為標記物，同時利用聚多巴胺功能化的金納米粒子作為電極修飾材料，從而實現了肺癌標志物CEA、CA125、SCCA的檢測，具備靈敏度高，特異性強，檢測限低，對肺癌的早期檢測具有重要的科學意義和應用價值。

技術領域

本發明屬于免疫分析和生物傳感技術領域，涉及一種夾心型肺癌標志物電化學傳感器的制備方法及應用。具體是采用新型納米功能材料作為催化劑標記檢測抗體，實現對肺癌標志物CEA、CA125、SCCA的靈敏檢測。

背景技術

肺癌具有較高的發病率，不易察覺，且腫瘤的生長和轉移的速度快，成為對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。因此，實現肺癌標志物的靈敏檢測，對于肺癌的早期發現和早期治療非常重要。目前，對于肺癌標志物的檢測方法有很多，如酶聯免疫法，放射免疫法等，但這些方法在檢測過程中可能需要大型儀器設備，存在放射性污染等問題，因此，發明一種特異性強，靈敏度高，檢測速度快，操作簡便的肺癌腫瘤標志物傳感器十分重要。

電化學免疫傳感器依靠抗原與其相應抗體的特異性結合，已經廣泛應用于肺癌及各種腫瘤標志物的檢測，一般可分為夾心型免疫傳感器和無標記型免疫傳感器兩種。夾心型電化學免疫傳感器結合了高特異性的免疫分析技術和高靈敏的電化學分析技術，具有靈敏度高、檢測范圍寬、檢測下限低、檢測快速等優點，已廣泛應用于環境監測、食品安全控制、生物監測、臨床檢驗等領域。

核殼結構的雙金屬納米復合材料因其獨特的光學、電學以及化學性質，目前已在生產、生活及科研中得到了廣泛應用。氮摻雜石墨烯具有大的表面積、良好的導電性和生物相容性，被廣泛用于電池、傳感器等領域。本發明采用聚多巴胺功能化的金納米粒子作為基底材料，Au@Pt DNs/NG/Cu²⁺作為催化材料，并與檢測抗體進行孵化作為標記物，構建了用于肺癌標記物檢測的夾心型電化學免疫傳感器。

發明內容

本發明提供了一種夾心型肺癌標志物電化學傳感器的制備方法及應用，實現了對肺癌標志物的超靈敏檢測。

本發明的目的之一是提供一種夾心型肺癌標志物電化學傳感器的制備方法。

本發明的目的之二是將所制備的Au@Pt DNs/NG/Cu²⁺標記的傳感器應用于肺癌標志物的高靈敏、特異性檢測。

本發明的技術方案，包括以下步驟。

1. 一種夾心型肺癌標志物電化學傳感器的制備方法，步驟如下：

（1）將直徑為4 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

（2）取6 μL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的聚多巴胺功能化的金納米粒子分散液滴涂到電極表面，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，晾干；

（3）將6 μL、8 ~ 12 μg/mL的肺癌標志物捕獲抗體Ab₁滴加到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中干燥；

（4）繼續將3 μL、0.5 ~ 1.5 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到電極表面，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中晾干；

（5）滴加6 μL、0.0001 ~ 100 ng/mL的一系列不同濃度的肺癌標志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中晾干；

（6）將6 μL、1.5 ~ 3.5 mg/mL檢測抗體孵化物Au@Pt DNs/NG/Cu²⁺-Ab₂溶液滴至電極表面，置于4℃冰箱中孵化40 min，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中晾干，制得一種夾心型肺癌標志物電化學傳感器。