[發明專利]一種檢測替格瑞洛藥效的試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201810212165.3
• 申請日: 2018-03-15
• 公開（公告）號: CN108411012B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 韓雅玲;童方念;張效林;曹禹;李毅;田孝祥;閆承慧;劉丹
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍沈陽軍區總醫院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/18;C12Q1/14;C12Q1/04;G01N30/02;C12R1/44;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 陳錚

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種檢測替格瑞洛藥效的試劑盒及檢測方法。該試劑盒含有兩條引物、總DNA、2×KAPA HiFi HotStart ReadyMix和去離子水，所述引物為5’?ACTCCTACGGGRSGCAGCAG?3’和5’?GGACTACVVGGGTATCTAATC?3’。該試劑盒能夠檢測患者服用替格瑞洛后的藥物療效，為臨床指導藥物調整及個體化抗血小板治療提供了新的依據。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種檢測替格瑞洛藥效的試劑盒及檢測方法。

背景技術

急性ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)為累及心肌全層的透壁性心肌梗死，在急性期的死亡率極高，危害性很大。STEMI的發病機制是在冠狀動脈粥樣硬化的基礎上斑塊破裂，斑塊下脂質、膠原暴露，使血小板激活、附著、聚集，并最終激活血小板糖蛋白受體，使血小板聚集并結合纖維蛋白而致血栓形成，導致急性血管閉塞，進而導致閉塞血管供血區域心肌壞死。由于血小板聚集和激活在冠狀動脈粥樣硬化斑塊形成及斑塊破裂形成血栓過程中具有重要作用，因此目前冠心病治療的重要策略仍然是防止血栓事件的發生。

目前臨床上常用的抗血小板藥物主要包括阿司匹林(抑制血小板花生四烯酸代謝)、氯吡格雷(抑制二磷酸腺苷ADP P₂Y₁₂受體活性)、替羅非班(抑制血小板膜GPⅡb/Ⅲa受體活性)和西洛他唑(抑制磷酸二脂酶活性)等。這些藥物大多數為不可逆性抑制并且為單靶點作用的藥物，雖然能抑制血小板活化過程中的某個作用靶點，但由于其作用機制單一，服用后仍能通過其它靶點通路引起血小板的活化，使其治療效果被減弱。研究表明，4-30％人群對氯吡格雷的反應性低下或無反應，這部分患者發生心血管事件的風險明顯增加，嚴重影響患者的治療效果和臨床預后，這種現象被稱為氯吡格雷抵抗，氯吡格雷抵抗患者在優化抗血小板治療后，仍然存在一定程度的血小板聚集和活化，即治療后血小板高反應。2011年7月獲美國FDA批準上市的替格瑞洛是第一個口服可逆P2Y12 受體抑制劑。2012年11月29日，替格瑞洛(商品名為倍林達)通過我國國家食品藥品監督管理局(SFDA)審批，正式進入我國市場。替格瑞洛是一種環戊基三唑嘧啶類藥物，能夠選擇性地拮抗二磷酸腺苷受體，可逆性地作用于血小板細胞上的嘌呤2受體亞型P2Y12，且不引起后者構象的改變，是目前治療急性冠狀動脈綜合征的新型藥物。ONSET/OFFSET研究顯示其在口服后比氯吡格雷起效更加快速，血小板抑制程度更高，同時又因其是可逆性抑制P₂Y₁₂受體，因此在停藥后比氯吡格雷更快使血小板功能恢復至正常水平。由于替格瑞洛無需肝臟代謝，可直接轉化為活性物質，因此能夠很好的適用于氯吡格雷抵抗的患者。替格瑞洛較氯吡格雷有更好的血小板抑制作用及降低心血管病風險的作用，在急性冠狀動脈血栓性疾病中應用范圍更廣。

然而在血小板抑制劑藥物的研究中發現，部分患者在服用替格瑞洛早期的一段時間后仍然存在一定程度的血小板聚集，降低了臨床常規抗血小板治療效果及增加了血栓事件的發生。由于替格瑞洛對STEMI的作用及活性存在這種早期療效方面的個體差異，因此尋找一種新的方法檢測替格瑞洛對STEMI患者的治療效果，為檢測替格瑞洛藥效提供新的方法。

發明內容

本發明的目的在于針對目前臨床上急性ST段抬高型心肌梗死患者服用替格瑞洛后的用藥效果存在個體差異，一部分患者服用替格瑞洛后不能獲得很好的抗血小板治療效果并從中收益，從而提出一種檢測替格瑞洛藥效的試劑盒及檢測方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種檢測替格瑞洛藥效的試劑盒，該試劑盒含有兩條引物、總DNA、 2×KAPA HiFiHotStart ReadyMix和去離子水，所述引物為5’-ACTCCTACGGGRSGCAGCAG-3’和5’-GGACTACVVGGGTATCTAATC-3’。

所述引物是根據腸道菌屬16S rDNA所設計，所述腸道菌屬為葡萄球菌屬和不動桿菌屬。