[發明專利]一種通用型DHAV多肽間接ELISA抗體檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201810211223.0
• 申請日: 2018-03-14
• 公開（公告）號: CN108445208B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 黃兵;李玉峰;王濤;胡峰;劉存霞;郭效珍;史玉穎;劉玉山;宋敏訓;王林
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院家禽研究所;濟南億民動物藥業有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

1.一種通用型DHAV多肽間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于，包括以通用型DHAV合成多肽W8包被的ELISA板；所述合成多肽W8的氨基酸序列結構為N-LRLKTLAFELHLEIE-CooH。

2.根據權利要求1所述的通用型DHAV多肽間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述合成多肽W8包被的ELISA板的制備方法為：用pH9.6的0.05M碳酸鹽緩沖液作包被液，將所述合成多肽W8稀釋至濃度為1μg/mL，按100μL/孔劑量加入至ELISA反應板中，于37℃下作用2小時，并于4℃包被過夜，拍干后用T20 blocking buffer于37℃封閉2小時，以pH7.4、含濃度0.05％吐溫-20的PBS進行洗滌，拍干并待其干燥后裝入含干燥劑的包裝袋保存，備用。

3.根據權利要求1或2所述的通用型DHAV多肽間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括樣品稀釋液、10×濃縮洗滌液、酶結合物工作液、顯色液、終止液、陽性對照和陰性對照。

4.根據權利要求3所述的通用型DHAV多肽間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

5.根據權利要求4所述的通用型DHAV多肽間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于：

所述樣品稀釋液為含濃度0.05％吐溫-20的0.01M的磷酸鹽緩沖液，pH7.4；

所述10×濃縮洗滌液 為含濃度0.5％吐溫-20的0.1M的磷酸鹽緩沖液，pH7.4；

所述酶結合物工作液為HRP-羊抗鴨IgG；

所述顯色液為體積比1：1的濃度0.2mg/mL四甲基聯苯胺溶液和含濃度0.5‰過氧化氫尿素的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液的混合液；

所述終止液為濃度0.31％氫氟酸溶液；

所述陽性對照為經篩選獲得的DHAV-1和DHAV-3混合陽性血清，其OD_650nm≥1.0，并加入1000U/mL的青鏈霉素；

所述陰性對照為經篩選獲得的陰性血清，其OD_650nm≤0.25，并加入1000U/mL的青鏈霉素。