[發(fā)明專(zhuān)利]抗CD123單鏈抗體及其組合的嵌合抗原受體和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810207761.2
• 申請(qǐng)日: 2018-03-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108409840B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張巍;單娟娟;趙文旭;陳軍;黃霞;趙永春;徐艷敏;張茜真
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 重慶精準(zhǔn)生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/00
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/00;C07K16/28;C07K19/00;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/02
• 代理公司: 北京元本知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11308
• 代理人: 黎昌莉

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種抗CD123單鏈抗體及其組合的嵌合抗原受體和應(yīng)用。本發(fā)明的識(shí)別CD123抗原的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。抗CD123抗原的嵌合抗原受體，由識(shí)別CD123抗原的多肽(ScFv)，鉸鏈區(qū)，跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號(hào)域依次連接組成。抗CD123抗原的嵌合抗原受體在免疫細(xì)胞中表達(dá)后，不僅可以有效的清除表達(dá)CD123抗原的腫瘤靶細(xì)胞，而對(duì)陰性抗原(不表達(dá)CD123)的腫瘤細(xì)胞沒(méi)有毒性作用；并且能夠維持靶向CD123的嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)在病人細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的陽(yáng)性率，在靶抗原刺激后能夠長(zhǎng)時(shí)間的進(jìn)行增殖，能夠用于腫瘤的靶向治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及抗CD123單鏈抗體及其組合的嵌合抗原受體和應(yīng)用，還涉及抗CD123抗原的嵌合抗原受體的慢病毒載體和應(yīng)用。

背景技術(shù)

過(guò)繼細(xì)胞治療(adoptive cell therapy，ACT)是生物治療技術(shù)的一種，對(duì)自體免疫細(xì)胞(主要是T細(xì)胞)進(jìn)行體外擴(kuò)增，然后將其回輸給腫瘤患者以達(dá)到治療目的的方法，被認(rèn)為是繼手術(shù)、放、化療后的第4種治療方式，在臨床治療中受到廣泛應(yīng)用。過(guò)繼細(xì)胞治療廣泛應(yīng)用的主要是：淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞(lymphokine activated killer cell，LAK)與IL-2聯(lián)合治療晚期惡性腫瘤取得了一定療效；腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(tumor infiltratinglymphocytes，TIL)臨床試驗(yàn)中治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤取得了較好的效果；細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine induced killer cell，CIK)，目前國(guó)內(nèi)開(kāi)展較多的臨床試驗(yàn)，對(duì)肝癌、肺癌等腫瘤取得了顯著的效果。但是目前上述三種治療方法均需活化T細(xì)胞，T細(xì)胞活化需要兩種活化信號(hào)，即T細(xì)胞表面的TCR-CD3與MHC-Ⅰ分子結(jié)合為活化的第一信號(hào)，決定T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性；T細(xì)胞表面的共刺激分子與相應(yīng)配體結(jié)合為活化的第二信號(hào)，決定T細(xì)胞增殖。但腫瘤細(xì)胞、腫瘤微環(huán)境可下調(diào)MHC、配體分子，從而抑制T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。因此需要可進(jìn)行基因改造，主要有兩種方式：基因轉(zhuǎn)導(dǎo)TCR(T cell receptor，TCR)和嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)。

嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor)簡(jiǎn)稱CAR，是模擬TCR功能的人工受體，由抗原識(shí)別域、鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)及胞內(nèi)信號(hào)域依次連接組成，胞內(nèi)信號(hào)域通常為CD3ζ鏈或FcRγ，或與一種或多種共刺激分子相連，如4-1BB(CD137)，CD28，ICOS(CD278)。腫瘤細(xì)胞表面的抗原(受體)與嵌合抗原受體的抗體(配體)結(jié)合時(shí)，通過(guò)鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)將信號(hào)傳遞至胞內(nèi)，胞內(nèi)信號(hào)域?qū)⑿盘?hào)轉(zhuǎn)化為活化信號(hào)，激活效應(yīng)細(xì)胞，效應(yīng)細(xì)胞增殖、產(chǎn)生細(xì)胞因子從而殺傷腫瘤細(xì)胞。雖然CAR-T治療腫瘤已經(jīng)顯現(xiàn)出了一定的腫瘤清除能力，尤其是CD19-CAR在血液系統(tǒng)腫瘤方面的治療取得了突破性的進(jìn)展，但是CAR-T治療仍然還存在一系列問(wèn)題仍需進(jìn)一步探索解決：1，CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)增殖能力差；2，由于是人工受體仍然存在一定的安全隱患。

急性髓性白血病(Acute myeloid leukemia，AML)是髓系造血干/祖細(xì)胞惡性疾病，以骨髓與外周血中原始和幼稚髓性細(xì)胞異常增生為主要特征多數(shù)病例病情急重，預(yù)后兇險(xiǎn)，如不及時(shí)治療常可危及生命；常規(guī)的誘導(dǎo)化療雖然能夠緩解AML但是最終并不能阻止AML的復(fù)發(fā)以及復(fù)發(fā)患者高的死亡率。然而AML的常規(guī)治療已經(jīng)50年未有改變，急需尋找新的改變。