[發明專利]通過血液中miR-124-3p和GATA3-AS1聯合檢測胃癌的試劑盒

在審

• 申請號: 201810207469.0
• 申請日: 2018-03-14
• 公開（公告）號: CN108315417A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 廖興華;姚奧;郭偉;李馥正;翟雷壘;王寧;孫兵兵;劉義;項園
• 申請（專利權）人: 深圳瑞科生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 吳陽

本發明公開了一種通過血液中miR?124?3p和GATA3?AS1聯合檢測胃癌的試劑盒，屬于生物檢測領域。本發明試劑盒包括擴增miR?124?3p、GATA3?AS1和內參U6的上下游引物，這些引物序列如SEQ ID NO.1?6所示。利用本發明試劑盒，通過實時熒光定量PCR檢測待測者血清中has?miR?124?3p與GATA3?AS1的相對表達量，若待測者血清中has?miR?124?3p相對表達量與正常人之比低于0.56，且GATA3?AS1相對表達量與正常人之比高于1.56，則待測者患有胃癌的可能性高于90％。本發明對胃癌進行檢測，具有靈敏度高、準確性高且操作簡單等優點。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，提供了一種通過血液中miR-124-3p和GATA3-AS1聯合檢測胃癌的試劑盒。

背景技術

胃癌是發生于消化系統中最常見的惡性腫瘤，其發病率位居全世界消化系統惡性腫瘤第一位，有資料顯示，目前我國胃癌發病率及死亡率居惡性腫瘤第二位。由于胃癌早期癥狀不明顯而難被患者察覺，一般有明顯癥狀及就醫時都已是中晚期胃癌，因錯過了最佳的治療時間，所以胃癌患者的病死率較高，且生存質量較差。因此胃癌的早期發現、早期診斷，是提高療效的關鍵。

MicroRNA(miRNA)是一類內源性的非編碼RNA，長約為20個核苷酸左右，miRNA廣泛存在于真核生物的細胞內，能通過與3’端或5’端的非翻譯區結合方式對DNA進行直接或間接的調控，從而影響細胞的增殖、分化、凋亡等，達到調節生物體生長與發育。miRNAs不僅存在組織及細胞中，同時存在許多體液中，包括血清，血漿，唾液，尿液和羊水。通常把血漿或是血清miRNA認為是循環miRNAs。miRNAs在體液的存在可表示無創癌癥生物學標志物。由于失調的miRNA表達的早期事件在腫瘤發生，檢測循環miRNA水平也可用于早期癌癥診斷和治療反應的預測以及潛在的新病人選擇標準的臨床試驗中的作用。近年來研究發現胃癌的發生與發展都涉及到多種miRNA的表達異常。Hsa-miR-124-3p是miR-124家族成員之一，有相關研究報道了miR-124與人類胃癌具有一定相關性，其表達水平與胃癌的發展程度呈負相關。

反義鏈長鏈非編碼RNA是一類染色體位置、序列結構比較特殊的長鏈非編碼RNA，在細胞內廣泛存在，并且在以往的研究中已經證實其與腫瘤有著密切的關系，GATA3-AS1是其中一種。GATA3在胃癌中是一種促癌因子，其表達與胃癌的發展程度呈正相關，其反義鏈lncRNAGATA3-AS1可以通過互補序列結合，從而增強其穩定性，進而促進腫瘤的發生發展。

發明內容

本發明的目的在于提供miR-124-3p及GATA3-AS1基因在制備胃癌檢測試劑盒中的應用。本發明的目的還在于提供一種檢測胃癌的試劑盒。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

本發明通過研究發現miR-124-3p能與GATA3-AS1競爭性結合，抑制其對下游靶標基因的作用，通過利用血液中miR-124-3p和GATA3-AS1的表達水平可以對胃癌進行診斷。因此，miR-124-3p及GATA3-AS1基因能夠用于制備胃癌檢測試劑盒。

一種檢測胃癌的試劑盒，該試劑盒通過實時熒光定量PCR檢測血液中miR-124-3p與GATA3-AS1的表達水平來判斷是否患有胃癌。該試劑盒包括擴增miR-124-3p、GATA3-AS1和內參的上下游引物，還可以包括實時熒光定量PCR試劑、逆轉錄試劑，以及RNA提取試劑。所述的內參優選為U6基因。

優選的，所述的上下游引物分別如下：

miR-124-3p上游引物：GCCGCTAAGGCACGCG，

miR-124-3p下游引物：TATGGTTGTTCACGACTCCTTCAC；

GATA3-AS1上游引物：TAAGGGGCTGGCGATCAAC，