[發明專利]一種人纖維蛋白原的制備方法在審
| 申請號: | 201810199160.1 | 申請日: | 2018-03-12 |
| 公開(公告)號: | CN108191968A | 公開(公告)日: | 2018-06-22 |
| 發明(設計)人: | 雷紅軍;莊文琴 | 申請(專利權)人: | 常州市蒽盜鐘情生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C07K14/75 | 分類號: | C07K14/75;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/16;C07K1/14;C07K1/36 |
| 代理公司: | 北京風雅頌專利代理有限公司 11403 | 代理人: | 朱親林 |
| 地址: | 213000 江蘇省常州市武進區常武*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 人纖維蛋白原 沉淀 吸附 制備 粗制品 非滲透性保護劑 干熱病毒滅活 凝血因子VIII 海藻糖溶液 賴氨酸處理 纖維蛋白原 脂包膜病毒 血液制品 卵磷脂 病毒傳播 病毒滅活 促進凝血 甘油三酯 凝膠吸附 生物活性 抽提液 粗提物 甘氨酸 賴氨酸 冷乙醇 凝膠柱 溶解度 酸沉淀 雜蛋白 樹脂 乙醇 層析 凍干 復溶 膠束 滅活 人血 溶出 損傷 載入 體內 細胞 保證 安全 | ||
1.一種人纖維蛋白原的制備方法,其特征在于,該制備方法包括如下步驟:
取新鮮人血漿按質量比10:1加入濃度為0.1mol/L的聚乙二醇-1000,于35~37℃攪拌混合,于4℃離心,取沉淀按質量比1:8加入枸櫞酸鹽緩沖液抽提,取抽提液按質量比10:1加入賴氨酸,于2~4℃攪拌混合,得攪拌混合物;
取攪拌混合物按質量比1:7~10加入濃度為1.2mol/L的乙醇,于1000r/min離心,取沉淀A,按質量份數計,取10~15份沉淀A、3~5份枸櫞酸鈉、4~6份鹽酸精氨酸、0.4~0.9份氯化鈉、70~90份注射用水混合,于25~30℃攪拌混合1~2h,得混合液,取混合液先于pH7.0~7.5,10~15℃過CG-6樹脂,振蕩吸附2~3h,收集初級流穿液,再取初級流穿液于pH7~8,氯化鈉溶液濃度為40~60mmol/L的條件下過Toyopeal DEAE-650M層析柱,凝膠吸附3~5h,收集流穿液;
取流穿液按質量比70~80:1:0.3~0.5加入聚山梨酯-80、磷酸三丁酯,于23~26℃攪拌混合,得攪拌混合液,取攪拌混合液按質量比10:2:3加入甘氨酸、濃度為2mol/L氯化鈉溶液混合,于10~15℃靜置,離心,取沉淀,重復加入甘氨酸、氯化鈉溶液,靜置離心過程,取最終沉淀;
取最終沉淀按質量比1:6加入枸櫞酸鹽緩沖液,于25~30℃攪拌混合,超濾,取超濾液,取超濾液按質量比100:0.25:1加入鹽酸精氨酸混合,調節pH至6.5~7.5,經0.22μm微孔濾膜過濾,取濾液濃縮,得濃縮物;
按質量份數計,取20~30份濃縮物、15~20份甘油三酯、1~3份卵磷脂、120~150份水、12~15份濃度為50mmol/L海藻糖溶液,于280W超聲,取超聲液冷凍干燥,再于98~100℃干熱滅活20~30min,得人纖維蛋白原。
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