[發明專利]一種高純度的多臂抗癌偶聯物的提取方法

有效

• 申請號: 201810199003.0
• 申請日: 2018-03-12
• 公開（公告）號: CN110256533B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 袁建棟;黃仰青;宋云松
• 申請（專利權）人: 博瑞生物醫藥（蘇州）股份有限公司
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/20;C07K1/18;A61P35/00
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本發明公開了一種純度大于99％的式(Ⅰ)化合物，該高純度藥用化合物是通過下述方法得到的：(1)將式(Ⅰ)化合物的粗品，利用離子對色譜法，使用反相HPLC進行第一步純化，使用流動相進行梯度洗脫；(2)第一步純化后，進行預脫鹽處理，使用流動相進行梯度洗脫；(3)預脫鹽處理完畢，使用流動相沖洗離子交換柱，達到平衡的目的；(4)利用離子交換色譜法進行離子交換，進行第二步純化，將殘留的庚烷磺酸除去，得到純的式(Ⅰ)化合物。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，涉及可藥用化合物，具體涉及一種高純度的多臂抗癌偶聯物的提取方法。

背景技術

中國專利申請201710263114.9公開了一種多臂抗癌偶聯物BGC0222，該化合物的結構如式(Ⅰ)所示：

該化合物為多臂偶聯物化合物，其藥物載體的基本結構為四臂聚乙二醇，該四臂聚乙二醇被稱為4ARM-PEG-20K，其分子量約為20kDa左右，分子量大，結構復雜。在制備BGC0222的過程中，BGC0222的粗品中含有較多雜質，這些雜質主要為沒有偶聯完全的化合物，這些雜質的存在直接影響藥物的載藥量。為了提高藥物的載藥量，唯一的方法就是將這些沒有偶聯完全的化合物除去，以提高BGC0222的純度，但是由于這些雜質分子量大，結構復雜，使用常規的分離方法很難將這些雜質去除干凈。

本申請研發人員通過深入研究發現，利用離子對色譜法，使用反相HPLC純化，并使用庚烷磺酸鈉/磷酸二氫鈉/水/乙腈體系做流動相，可以將這些雜質很好的去除，提高藥物純度，并應用到相關生產工藝上。但是由于庚烷磺酸鈉在HPLC制備純化后轉化成庚烷磺酸，庚烷磺酸屬于強酸，會和BGC0222成鹽，利用弱酸無法將庚烷磺酸完全置換出來，使得在后續純化的脫鹽過程中，無法將庚烷磺酸徹底脫除干凈，還有較多的庚烷磺酸和BGC0222成鹽，直接影響了藥物的純度及后續成藥用鹽的穩定性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種BGC0222純度大于99％的提取方法：

(1)將BGC0222的粗品，利用離子對色譜法，使用反相HPLC進行第一步純化，使用流動相進行梯度洗脫；

(2)第一步純化后，進行預脫鹽處理，使用流動相進行梯度洗脫；

(3)預脫鹽處理完畢，使用流動相沖洗離子交換柱，達到平衡的目的；

(4)利用離子交換色譜法進行離子交換，進行第二步純化，將殘留的庚烷磺酸除去，得到純的BGC0222。

其中，步驟(1)所使用的填料為蘇州納微科技的Unisil 10-300 C18，流動相水相為加入磷酸二氫鈉作為緩沖鹽的庚烷磺酸鈉水溶液，流動相有機相為乙腈。優選0.02M磷酸二氫鈉/0.0075M庚烷磺酸鈉水溶液為流動相水相。

步驟(2)中，預脫鹽的目的是將制備純化分離得到的餾分中大量的鹽先除掉一部分，因為太多的鹽用離子交換方法無法脫除干凈，超出填料的離子交換量。

預脫鹽使用的流動相水相可以為醋酸水溶液、甲酸水溶液，有機相可以為甲醇、乙醇、乙腈中的一種或其混合溶液，優選5‰(v/v)醋酸水溶液作為流動相水相，乙腈作為流動相有機相。

由于BGC0222樣品的水溶液呈粘稠狀，步驟(4)分離純化前的步驟(3)，需要使用有機溶劑與水的混合溶液(即流動相)對離子交換柱進行沖洗，以達到降低樣品過柱時的粘稠度，平衡離子交換柱的目的。使用的流動相水相為含有有機酸的水溶液，流動相有機相為乙腈、甲醇、乙醇中的一種或其混合溶液。

其中，有機酸可以為醋酸、甲酸、丙酸等，優選醋酸。最優選的流動相水相為5‰(v/v)醋酸水溶液，流動相有機相為乙腈，且醋酸水溶液和乙腈的體積比為3:2。