[發明專利]熊膽粉中熊去氧膽酸含量的液相色譜-質譜檢測方法

在審

• 申請號: 201810198385.5
• 申請日: 2018-03-12
• 公開（公告）號: CN108717084A
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 劉然;張克祿;謝亞楠;李悅;許勤虎
• 申請（專利權）人: 天津量信檢驗認證技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 劉玲

1.一種熊膽粉中熊去氧膽酸含量的液相色譜-質譜檢測方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

1)標準工作液的配制：

準確稱取熊去氧膽酸標準品0.5g，用甲醇溶解稀釋并轉移至100mL容量瓶中定容，配制成濃度為0.5g/L的熊去氧膽酸標準工作液，備用；

2)樣品工作液的配制：

準確稱量0.1g熊去氧膽酸樣品于燒杯中，加入熊去氧膽酸提取液溶解，分為3～5次將樣品稀釋液轉移至100mL容量瓶中，旋渦混勻后超聲振蕩提取30min并冷卻至室溫，用熊去膽氧酸提取液定容并轉移至離心機進行離心處理后吸取上清液并用微孔濾膜過濾，備用；

3)液相色譜-串聯質譜法檢測分析：

將標準工作液與樣品工作液分別注入到液相色譜-串聯質譜儀中，進行液相色譜-質譜分析，以標準工作液的峰面積與樣品工作液峰面積進行定量比較，保留時間定性，外標法進行計算，計算樣品中熊去氧膽酸的質量分數w。

2.根據權利要求1所述的熊膽粉中熊去氧膽酸含量的液相色譜-質譜檢測方法，其特征在于：所述步驟3)中熊去氧膽酸的質量分數w采用如下公式進行計算：

w＝(c*V*10^-7/m)*100％

其中：c為樣品工作液中熊去氧膽酸的含量，單位為ng/mL；

V為樣品工作液的體積，單位為mL；

m為樣品的質量，單位為g。

3.根據權利要求1所述的熊膽粉中熊去氧膽酸含量的液相色譜-質譜檢測方法，其特征在于：所述的液相色譜條件為：

色譜柱：RP-C₁₈ 1.7μm 50×2.1mm；

流動相：A相為甲酸水溶液，B相為甲酸甲醇溶液；

流速：0.15-0.5mL/min；

柱溫：25-40℃；

進樣量：1-10μL；

檢測器采用UV紫外線檢測器；

所述的質譜條件為：

質譜離子源：電噴霧正離子；

質譜離子源溫度：325℃；

檢測方式：MRM多反應檢測；

脫溶劑氣體：N₂；

脫溶劑氣體流速：10～40Arb；

輔助氣流速：0-20Arb；

離子傳輸管溫度：280～400℃；

蒸發器溫度：280-400℃。

4.根據權利要求3所述的熊膽粉中熊去氧膽酸含量的液相色譜-質譜檢測方法，其特征在于：所述液相色譜條件中流動相的洗脫條件為梯度洗脫，0min甲酸水溶液：甲酸甲醇為90：10；3min甲酸水溶液：甲酸甲醇為90：10；5min甲酸水溶液：甲酸甲醇為10：90；7min甲酸水溶液：甲酸甲醇為10：90；7.1mim甲酸水溶液：甲酸甲醇為90：10；10min甲酸水溶液：甲酸甲醇為90：10。

5.根據權利要求3所述的熊膽粉中熊去氧膽酸含量的液相色譜-質譜檢測方法，其特征在于：所述質譜條件中，熊去氧膽酸的質譜參數為：母離子391.14m/z，子離子359.03m/z。

6.根據權利要求1所述的熊膽粉中熊去氧膽酸含量的液相色譜-質譜檢測方法，其特征在于：所述熊去氧膽酸提取液為質量分數為15％的甲醇溶液。

7.根據權利要求1所述的熊膽粉中熊去氧膽酸含量的液相色譜-質譜檢測方法，其特征在于：所述離心機的轉速為8000r/min，離心3min。