[發(fā)明專利]一種三鏈DNA分子信標(biāo)結(jié)合納米孔技術(shù)聯(lián)用的抗體檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810198020.2
• 申請(qǐng)日: 2018-03-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108467883A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳海臣;劉蕾;郭秉元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院化學(xué)研究所;中國(guó)科學(xué)院高能物理研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6804
• 分類號(hào): C12Q1/6804;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;何葉喧

1.一種用于檢測(cè)目標(biāo)抗體的分子組合，包括探針?lè)肿雍涂贵w捕獲分子；

所述探針?lè)肿邮菍⒐檄h(huán)修飾于單鏈DNA分子I的5’末端得到的；單鏈DNA分子I中，3’端具有由n個(gè)核苷酸組成的結(jié)合區(qū)A；

所述抗體捕獲分子由單鏈DNA分子II和兩個(gè)抗原分子組成；單鏈DNA分子II位于中間，單鏈DNA分子II的兩個(gè)末端分別連接一個(gè)與目的抗體對(duì)應(yīng)的抗原分子；DNA分子II中，5’端具有由n個(gè)核苷酸組成的結(jié)合區(qū)B，3’端具有由n個(gè)核苷酸組成的結(jié)合區(qū)C；

結(jié)合區(qū)B和結(jié)合區(qū)C為反向序列；結(jié)合區(qū)B與結(jié)合區(qū)A為反向互補(bǔ)序列。

2.一種用于檢測(cè)目標(biāo)抗體的復(fù)合物，由探針?lè)肿雍涂贵w捕獲分子共孵育形成；

所述探針?lè)肿邮菍⒐檄h(huán)修飾于單鏈DNA分子I的5’末端得到的；單鏈DNA分子I中，3’端具有由n個(gè)核苷酸組成的結(jié)合區(qū)A；

所述抗體捕獲分子由單鏈DNA分子II和兩個(gè)抗原分子組成；單鏈DNA分子II位于中間，單鏈DNA分子II的兩個(gè)末端分別連接一個(gè)與目的抗體對(duì)應(yīng)的抗原分子；DNA分子II中，5’端具有由n個(gè)核苷酸組成的結(jié)合區(qū)B，3’端具有由n個(gè)核苷酸組成的結(jié)合區(qū)C；

結(jié)合區(qū)B和結(jié)合區(qū)C為反向序列；結(jié)合區(qū)B與結(jié)合區(qū)A為反向互補(bǔ)序列。

3.如權(quán)利要求1所述的分子組合或權(quán)利要求2所述的復(fù)合物，其特征在于：

所述n為6-10之間的任意自然數(shù)；

所述單鏈DNA分子I的長(zhǎng)度為18-22bp；

所述單鏈DNA分子II的長(zhǎng)度為33-41bp。

4.如權(quán)利要求1至3任一所述的分子組合，或，權(quán)利要求2或3所述的復(fù)合物，其特征在于：

所述n為8；

所述單鏈DNA分子I的長(zhǎng)度為20bp；

所述單鏈DNA分子II的長(zhǎng)度為37bp。

5.權(quán)利要求1至4任一所述的分子組合，或，權(quán)利要求2至4任一所述的復(fù)合物，其特征在于：所述能夠?qū)⒐檄h(huán)與DNA分子連接的化合物為二茂鐵。

6.權(quán)利要求1至5任一所述的分子組合，或，權(quán)利要求2至5任一所述的復(fù)合物，其特征在于：所述單鏈DNA分子I如序列表的序列1所示；所述單鏈DNA分子II如序列表的序列2所示。

7.一種系統(tǒng)，包括權(quán)利要求1至6任一所述的分子組合和樣品池系統(tǒng)；

所述樣品池系統(tǒng)包括兩個(gè)隔室，兩個(gè)隔室被聚四氟乙烯膜分隔；所述聚四氟乙烯膜中間具有一個(gè)直徑為100-150μM的孔，所述通孔被磷脂雙分子層充滿，在所述磷脂雙分子層中存在一個(gè)由α-溶血素七聚體蛋白形成的納米孔；樣品池系統(tǒng)中應(yīng)用Ag/AgCl電極組成閉合回路。

8.一種系統(tǒng)，包括權(quán)利要求2至6任一所述的復(fù)合物和樣品池系統(tǒng)；

所述樣品池系統(tǒng)包括兩個(gè)隔室，兩個(gè)隔室被聚四氟乙烯膜分隔；所述聚四氟乙烯膜中間具有一個(gè)直徑為100-150μM的孔，所述通孔被磷脂雙分子層充滿，在所述磷脂雙分子層中存在一個(gè)由α-溶血素七聚體蛋白形成的納米孔；樣品池系統(tǒng)中應(yīng)用Ag/AgCl電極組成閉合回路。

9.權(quán)利要求1至6任一所述的分子組合，或，權(quán)利要求2至6任一所述的復(fù)合物，或，權(quán)利要求7或8所述的系統(tǒng)在檢測(cè)目的抗體中的應(yīng)用。

10.一種檢測(cè)樣本中目的抗體的方法，包括如下步驟：將待測(cè)樣本與權(quán)利要求2至6任一所述的復(fù)合物共同孵育后加入權(quán)利要求7或8中所述的樣品池系統(tǒng)中，通過(guò)分析是否產(chǎn)生特征電信號(hào)實(shí)現(xiàn)對(duì)目的抗體的檢測(cè)。