[發明專利]一種多重液相芯片檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201810197226.3
• 申請日: 2018-03-10
• 公開（公告）號: CN108490173A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 黃韌;李秀珍;張鈺;郭鵬舉;叢鋒
• 申請（專利權）人: 廣東省實驗動物監測所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N21/64;C12N15/11
• 代理公司: 廣州凱東知識產權代理有限公司 44259
• 代理人: 羅丹

本發明提供了一種多重液相芯片檢測方法及試劑盒，以HSV?1病毒培養物及BV gD、SIV p27、SRV p27、HTLV?1envelope重組蛋白分別作為BV、SIV、SRV、STLV的抗原進行不同編號磁珠的包被，以包被了不同抗原的磁珠為載體，在BV、SIV、SRV和STLV抗體單一液相芯片檢測方法的基礎上，建立同時檢測猴BV和其他三種逆轉錄病毒共4種抗體的多重液相芯片檢測方法，為BV、SIV、SRV和STLV抗體監測提供一種快速、有效、高通量的檢測方法。

技術領域

本發明涉及實驗動物病毒病檢測領域，更具體地說，涉及一種快速、準確、高通量檢測猴皰疹病毒、猴免疫缺陷病毒、猴D型逆轉錄病毒和猴嗜T淋巴細胞白血病病毒的多重液相芯片檢測方法及試劑盒。

背景技術

非人靈長類動物因其與人類相似的生理生化、免疫、遺傳等特征，儼然成為探索、解決人類健康和疾病問題的理想動物模型。隨著國際市場對實驗猴需求量的增加，對實驗猴的質量也提出了更為嚴格的要求，實驗猴從普通級向無特定病原體級(specificpathogen free,SPF)發展是必然趨勢。國際上對SPF級猴的定義主要指體內不含猴皰疹病毒、猴免疫缺陷病毒、猴逆轉錄病毒、猴嗜T淋巴細胞白血病病毒等特定病毒的猴。另外，美國Charles River Laboratories(CRL)曾提出了獲得全球眾多實驗動物使用者認可的無病毒抗體(virus antibody free，VAF)的概念，該標準滿足實驗動物繁育的要求也符合科研使用的實際需要。

BV(Monkey B virus,Cercopithecine herpesvirus 1)在分類上屬皰疹病毒科甲型皰疹病毒亞科純皰疹病毒屬。猴是B病毒的自然宿主，感染率可達10～60％，多數情況下呈良性經過，但人類感染主要表現為腦脊髓炎癥狀，常導致病人死亡。迄今為止，猴B病毒的基因組序列并未完全測序，但已獲得的序列與HSV的序列有較高的同源性。感染動物研究發現，猴病毒感染后，囊膜糖蛋白gB、gC和gD的抗體出現時間最早(感染后7d產生)、滴度最高，在體內維持時間也最長(2年以上)，表明囊膜蛋白具有較好的免疫原性和反應原性，是病毒診斷和防治研究的主要靶點。Perelygina等人表達了從猴B病毒gD表位庫中篩選出的一個免疫優勢表位(gD362-370)，該表位位于猴B病毒的C端，高度保守，不存在于HSV-1或HSV-2中，在臨床猴B病毒血清的檢測中表明95％的陽性血清能夠和該表位反應，而HSV-1和HSV-2抗血清并不與該表位反應，故研究中選取HSV-1病毒培養物及gD重組蛋白作為B病毒單一液相芯片檢測技術的抗原進行微球包被。

SIV(simian immunodeficiency virus)屬逆轉錄病毒科慢病毒屬，是RNA病毒，猴艾滋病(AIDS)的致病因子之一。其在天然宿主中不致病，只有跨種族感染才會出現類似人AIDS的免疫缺陷癥狀。衣殼蛋白p27構成SIV病毒粒子雙層殼的內殼，其氨基酸序列較為保守，含有誘導機體體液免疫和細胞免疫的主要抗原決定簇，而且同屬病毒的衣殼蛋白具有相同或相似的抗原性，即具有群抗原牲，因此被認為是SIV抗原檢測的標志物。

SRV(Simian type D retrovirus)屬于逆轉錄病毒科正逆轉錄病毒亞科β逆轉錄病毒屬，是單鏈RNA病毒，猴艾滋病(AIDS)的又一致病因子。其可分為內源性病毒(SERV)和外源性病毒(SRV)，比較SERV與SRV核酸序列的進化，表明SERV是SRV的祖先。目前已發現SRV有7個血清型，SRV-1、3、5主要流行在亞洲和印度恒河猴中，SRV-2主要流行在東南亞食蟹猴和豚尾猴中，SRV-4很少流行，主要從日本食蟹猴分離到，SRV-6從印度長尾葉猴分離到，SRV-7從野生印度恒河猴分離到。其中，SRV-1～3已測序完成，核衣殼蛋白p27的氨基酸序列高度保守。