[發(fā)明專利]鑒別紅鰭東方鲀個體性別的SNP分子標記及鑒別方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810195159.1
• 申請日: 2018-03-09
• 公開（公告）號: CN108774643A
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 仇雪梅;王智誠;李鑫;胡子文;王秀利
• 申請（專利權(quán)）人: 大連海洋大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879
• 代理公司: 大連非凡專利事務(wù)所 21220
• 代理人: 閃紅霞

本發(fā)明公開一種鑒別紅鰭東方鲀個體性別的SNP分子標記，其特征在于DNA序列如SEQ ID NO:1所示，所述序列中第121位點及第262位點的堿基N為C或G。鑒別方法按如下步驟進行：以紅鰭東方鲀基因組DNA為模板，以上游引物和下游引物進行PCR擴增，獲得PCR產(chǎn)物；所述上游引物和下游引物的DNA序列分別如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；對所得到的PCR產(chǎn)物進行測序，所測DNA序列的第121個堿基處和第262個堿基處同時為雙峰的個體即為紅鰭東方鲀雄魚，所測DNA序列序列的第121個堿基處和第262個堿基處同時為單峰的個體即為紅鰭東方鲀雌魚。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種鑒別紅鰭東方鲀個體性別的SNP分子標記及鑒別方法，尤其是一種同時獲得雌、雄判定結(jié)果、操作簡便、可提高鑒別準確性的鑒別紅鰭東方鲀個體性別的SNP分子標記及鑒別方法。

背景技術(shù)

紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）是我國北方沿海重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類，其肉味鮮美，營養(yǎng)豐富，深受東亞各國消費者的青睞。我國每年紅鰭東方鲀的養(yǎng)殖產(chǎn)量可達5000多噸，人工繁殖、育苗、養(yǎng)成技術(shù)基本成熟，但在種質(zhì)資源、新品種創(chuàng)制等方面，與產(chǎn)業(yè)的需求還有較大的差距，亟待摸清自然海域紅鰭東方鲀的群體資源狀況及養(yǎng)殖群體的遺傳結(jié)構(gòu),亟待解決由于近親繁殖而出現(xiàn)的疾病頻發(fā)、生長速度緩慢的遺傳衰退現(xiàn)象。在紅鰭東方鲀品種改良、新品種培育上，需要準確判別種魚的性別。但是紅鰭東方鲀雄魚在3齡以上、雌魚在4齡以上才能性成熟，在性成熟的排精和產(chǎn)卵之前，雌魚和雄魚在體型外貌上難以鑒別。單核苷酸多態(tài)性（Single nucleotide polymorphism，SNP）是指基因組DNA上由單個核苷酸突變所引起的DNA序列多態(tài)性，通過確定SNP與性別基因及雌、雄性別的緊密連鎖，可以在生物體任何生長發(fā)育階段鑒別其個體的性別。Takashi Kamiya,等，Plos Genetics,2012,8(7):e1002798，已證實紅鰭東方鲀位于Amhr2基因的第7271位點為紅鰭東方鲀的性別判定位點，但是以此單個位點鑒別紅鰭東方鲀個體性別存在著準確度較低的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的問題，提供一種同時獲得雌、雄判定結(jié)果、操作簡便、可提高鑒別準確性的鑒別紅鰭東方鲀個體性別的SNP分子標記及鑒別方法。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種鑒別紅鰭東方鲀個體性別的SNP分子標記，其特征在于DNA序列如SEQ ID NO:1所示，所述序列中第121位點及第262位點的堿基N為C或G。

一種用上述鑒別紅鰭東方鲀個體性別的SNP分子標記及鑒別方法，其特征在于按如下步驟進行：

a. 提取待鑒別紅鰭東方鲀性別個體的基因組DNA；

b. 用得到的基因組DNA為模板，以上游引物和下游引物進行PCR擴增，獲得PCR產(chǎn)物；所述上游引物和下游引物的DNA序列分別如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；

c. 對所得到的PCR產(chǎn)物進行測序，所測DNA序列的第121個堿基處和第262個堿基處同時為雙峰（套峰）的個體即為紅鰭東方鲀雄魚，所測DNA序列序列的第121個堿基處和第262個堿基處同時為單峰的個體即為紅鰭東方鲀雌魚。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了紅鰭東方鲀?nèi)鏢EQ ID NO:1所示DNA序列第121位點的SNP為新位點，與第262個位點SNP一一對應(yīng)，相關(guān)性系數(shù)R²=1，測序峰圖完全一致且與紅鰭東方鲀的性別完全吻合（第262位點的SNP已被證明與紅鰭東方鲀的雌雄緊密連鎖），進而發(fā)明以第121位點的SNP為分子標記對紅鰭東方鲀個體性別進行鑒定，可同時獲得雌、雄判定結(jié)果、操作簡便，提高了鑒別的準確性。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例兩個SNPs位點處的測序峰圖。

具體實施方式