[發明專利]一種用于鑒定甜瓜單性花的分子標記物TJcM02及其應用

有效

• 申請號: 201810191880.3
• 申請日: 2018-03-08
• 公開（公告）號: CN108239675B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 劉莉;張喬玲;華德平;付金玉
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 天津創智天誠知識產權代理事務所(普通合伙) 12214
• 代理人: 王秀奎

本發明公開了一種用于鑒定甜瓜單性花的分子標記物TJcM02及其應用，針對目前單性雌花甜瓜的選育中存在的問題，如年限長、效率低且成本高等缺點，本發明提供了一種鑒定甜瓜單性花的TJcM02分子標記及其專用引物，通過聚合酶鏈式反應，在甜瓜植株早期就可完成對單性雌花與非單性雌花甜瓜材料的區分，具有特異性好，準確率高，不受環境影響的優點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種用于鑒定甜瓜單性花的分子標記物TJcM02及其應用。

背景技術

甜瓜Cucumis melo L.屬于葫蘆科Cucurbitaceae，黃瓜屬Cucumis，是一種重要的園藝作物，其風味獨特品質優良，深受消費者歡迎。據聯合國糧農組織(FAO)數據顯示我國甜瓜產量和栽培面積均居世界第一，這對提升農民的經濟效益具有重要意義。甜瓜花性型按花器官著生部位可分為兩類，即單性雌花與兩性花，單性雌花與兩性花相比是一種理想的雜交育種材料，受到廣泛關注。目前栽培的甜瓜都是雄花兩性花，在雜交一代制種過程中，授粉需要人工去雄，操作較為繁鎖，若去雄操作不當會降低座果率和種子純度。因此選育單性雌花甜瓜，是當前甜瓜遺傳育種的重要目標之一。

Adnane Boualem證實甜瓜單性雌花由顯性單基因A控制，發現甜瓜的雄性兩性花是由于A基因單核苷酸突變導致A57V替換，造成CmACS-7編碼的乙烯生物合成酶發生突變造成的。此外，葫蘆科花性型的表達模式可以通過激素(如乙烯)和環境因素進行修飾。

當前對于單性雌花甜瓜的選育，一般還采用傳統雜交的方法，具有年限長、效率低且成本高等缺點。分子標記輔助育種可以直接從DNA水平對性狀進行選擇，具有高效，準確及經濟等優點，可大幅縮短育種周期，是傳統育種技術的有力補充。InDel標記具有準確性高、穩定性好等優點，并且其檢測簡單便捷，對儀器設備和技術要求較低，能夠基于插入/缺失位點兩側的序列設計特異引物進行PCR擴增，直接在電泳技術平臺上檢測即可。

開發合適的InDel分子標記，用于單性雌花甜瓜品種或品系的選育，能夠加快育種進程，提高育種效率，降低育種成本，具有重要的實際應用價值。

發明內容

針對目前單性雌花甜瓜的選育中存在的問題，如年限長、效率低且成本高等缺點，本發明提供了一種鑒定甜瓜單性花的TJcM02分子標記及其專用引物，通過聚合酶鏈式反應，在甜瓜植株早期就可完成對單性雌花與非單性雌花甜瓜材料的區分，具有特異性好，準確率高，不受環境影響的優點。

一種鑒定甜瓜單性花的分子標記TJcM02的專用引物，其特征是所述引物為從5`端到3`端的第1-32位的單鏈DNA序列的正向引物TTCAAATCTTCACAACTTTACCGTATTGATCC；從5`端到3`端的第1-30位單鏈DNA序列的反向引物GGTGGTCATTTTCATAGAACTTTCCCATAC。

利用本發明的分子標記專用引物，以待檢測材料的基因組DNA為模板，通過PCR擴增獲得分子標記，通過測序發現，在單性雌花的甜瓜材料中分子標記大小為249bp的PCR產物，從5`端到3`端的單鏈DNA序列為：TTCAAATCTTCACAACTTTACCGTATTGATCCCTTAAAAATGAAGTAAAAACAATAATGAACGAACTAAGACAATCACCATTTGAAAGTTTAAGGACCAAATGAACCAAAGTTAAAAGTATAGAAACAAAAATAAACATCGCTAAATAAACCAAATAAAACTAGAATTACTTAATTGAAACAAAATAATATGAAATGGATCAAATCTTTAGACTTTAGTGTATGGGAAAGTTCTATGAAAATGACCACC。

利用本發明的專用引物鑒定甜瓜的分子標記方法，其特征是提取甜瓜待檢測樣品的基因組DNA作為模板，利用分子標記專用引物進行聚合酶鏈式反應(PCR)擴增，再通過電泳對擴增產物進行檢測。

1)利用CTAB法提取待測甜瓜樣品任意組織或器官的基因組DNA。