[發(fā)明專利]一種冷飯團帶芽嫩莖的組培育苗方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810190666.6
• 申請日: 2018-03-08
• 公開（公告）號: CN108184673A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發(fā)明（設計）人: 張麗敏;王濟紅;席培宇;蔡國俊;彭熙;李安定;張建利;龍秀琴
• 申請（專利權）人: 貴州省山地資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 貴陽中工知識產權代理事務所 52106
• 代理人: 劉安寧

1.一種冷飯團帶芽嫩莖的組培育苗方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)外植體消毒：采集剛萌發(fā)5～10天的冷飯團新梢，去掉葉片，取帶芽嫩莖做外植體；沖洗干凈后，用3500mg.L^-1維生素C蒸餾水溶液浸泡50min，然后用3000mg.L^-1高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水沖洗3～5次，再用1000mg.L^-1氯化汞水溶液常規(guī)消毒10min，蒸餾水沖洗5次；

(2)植物細胞組織培養(yǎng)各階段的基本培養(yǎng)基均為：1/2MS+12g.L^-1瓊脂+30g.L^-1蔗糖，pH值5.0；各階段培養(yǎng)條件為：溫度24℃～26℃，光照為1500～2000Lux，光照時間為12～14h/d；

(3)腋芽初誘導培養(yǎng)：將消毒后的外植體按生長極性豎立接種，誘導腋芽萌發(fā)；培養(yǎng)25d后，萌發(fā)1個長1.5cm的單芽；培養(yǎng)基配方：基本培養(yǎng)基+3.0g.L^-1珍珠巖+2.0g.L^-1活性炭+1.5g.L^-1聚乙烯吡咯烷酮+1.0mg.L^-1噻苯隆+0.01mg.L^-1萘乙酸；

(4)愈傷組織誘導培養(yǎng)：將初誘導培養(yǎng)產生的腋芽剪切成長度0.5cm的小段后接種，誘導愈傷組織分化；培養(yǎng)40d后，產生直徑1.0cm的綠色疏松愈傷組織；培養(yǎng)基配方：基本培養(yǎng)基+3.0g.L^-1珍珠巖+2.0g.L^-1活性炭+1.5g.L^-1聚乙烯吡咯烷酮+0.8mg.L^-1噻苯隆+0.1mg.L^-12,4-二氯苯氧乙酸+0.1mg.L^-1萘乙酸；

(5)繼代增殖培養(yǎng)：用鑷子輕輕將愈傷組織分成直徑0.5cm的小塊后接種，誘導叢生芽分化；培養(yǎng)35d后，愈傷組織膨大生長，每塊直徑1.5cm，同時分化出愈傷組織和叢生芽，每塊分化4-5個芽；培養(yǎng)基配方：基本培養(yǎng)基+3.0g.L^-1珍珠巖+2.0g.L^-1活性炭+1.5g.L^-1聚乙烯吡咯烷酮+2.5mg.L^-1噻苯隆+0.1mg.L^-1吲哚丁酸。

(6)生根誘導培養(yǎng)：將繼代增殖形成的叢生芽剪切單芽后接種于的生根培養(yǎng)基上，誘導生根；培養(yǎng)25d后，20％開始生根，50d后，85％產生根系，每株2～5根，根長0.5～3.0cm；培養(yǎng)基配方：基本培養(yǎng)基+500mg.L^-1蛋白胨+0.3mg.L^-16-卞氨基嘌呤+1.0mg.L^-1吲哚丁酸。

2.如權利要求1所述的組培育苗方法，其特征在于方法的(3)、(4)、(5)3個階段的基本培養(yǎng)基中均添加3.0g.L^-1珍珠巖、2.0g.L^-1活性炭來吸附外植體分泌的粘液和有害物質，添加1.5g.L^-1聚乙烯吡咯烷酮抑制酚類物質的產生，將褐化率降至15％以下。