[發明專利]一種肝素鈉的精制工藝

在審

• 申請號: 201810189164.1
• 申請日: 2018-03-08
• 公開（公告）號: CN108250324A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 李海生
• 申請（專利權）人: 廣元市海鵬生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 成都弘毅天承知識產權代理有限公司 51230
• 代理人: 蔣秀清

本發明公開了一種肝素鈉的精制工藝，包括如下步驟：(1)溶解；(2)酶解；(3)調酸；(4)氧化；(5)沉淀；(6)干燥。本發明提供的肝素鈉的精制工藝將酶解法與氧化法結合為一體，先利用蛋白酶專一水解蛋白質的特點對蛋白質進行水解，再結合調酸除蛋白及氧化除雜法，對蛋白質及雜質進行脫除，最終得到高效價的精制肝素鈉。

技術領域

本發明涉及生化技術領域，尤其是涉及一種肝素鈉的精制工藝。

背景技術

肝素廣泛存在于在豬、牛、狗等哺乳動物的內臟和腸粘膜中。肝素主要是由D-葡糖胺，L-艾杜糖醛酸，N-乙酰葡萄糖胺及D-葡糖醛酸交替組成的粘多糖硫酸酯，分子量分布在6000～20000，為白色或類白色粉末，無毒無味，有吸濕性。肝素易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六環等有機溶劑，分子結構單元中含有5個硫酸基和2個羥基，呈強酸性，為聚陰離子，能與陽離子發生反應生成鹽。由于肝素在動物體中主要以肝素鈉-蛋白質復合物的形式存在，故使得目前從動物體中提取的粗品肝素鈉中會殘留一定量的蛋白質，使得肝素鈉的活性受到一定影響。

肝素的精制過程主要是對粗品肝素鈉進行除蛋白提純和脫色，達到國家藥典標準要求。在我國肝素的精制多采用高錳酸鉀氧化法和過氧化氫法。但是高錳酸鉀氧化法會產生二氧化錳吸食肝素的問題，使肝素鈉活性損失大，導致肝素鈉回收率低、色澤差；過氧化氧氧化法，因產品色澤較好，目前被普遍采用，但由于現有技術對氧化劑加入量及反應條件均難以控制，往往在實際生產過程中會加入過量的氧化劑，而反應條件也不適宜，最終對肝素鈉結構的破壞，使其收率低，活性低，難以得到較高純度的精品肝素鈉產品。

發明內容

本發明提供了一種肝素鈉的精制工藝，以解決現有肝素鈉精制使時因對肝素鈉結構產生破壞而難以得到較高純度的肝素鈉的問題。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案概述如下：

一種肝素鈉的精制工藝，包括以下步驟：

(1)溶解：將肝素鈉粗品溶于3.5％的氯化鈉溶液中，并加熱至48-53℃，用NaOH溶液調節pH至8.0-8.3，靜置2-3h后抽濾，除不溶性雜質，得澄清的濾液；

(2)酶解：在步驟(1)中所述的澄清的濾液中加入蛋白酶，調節pH至7-9，將溫度控制在40-45℃，酶解時間為5-6h；

(3)調酸：加入亞硫酸氫鈉作為保護劑，加入鹽酸調節pH至1.5-2，維持溫度在20-22℃，離心脫除蛋白；

(4)氧化：在步驟(3)所述的離心脫除蛋白的濾液中加入過氧化氫，過氧化氫的加入量為濾液質量的2-3％，調節pH至8-9，將溫度控制在25-27℃，進行氧化反應14-15h；

(5)沉淀：將步驟(4)所述的氧化反應完成的液體中加入鹽酸調節pH至6-7，加入與液體等量的95％的乙醇進行沉淀，沉淀時間為12-13h，抽出上清液，得到沉淀物，將沉淀物慢慢加入到丙酮中脫水二次；

(6)干燥：將步驟(5)所述的脫水后的沉淀物在55-60℃下真空烘干4-6h，得到精制肝素鈉。

更進一步地，步驟(1)中肝素鈉粗品與氯化鈉的比例為1:13-15。

更進一步地，步驟(2)中所述的蛋白酶的加入量為濾液質量的0.05％-0.1％。

綜上所述，由于采用了上述技術方案，本發明的有益效果是：

1.本發明提供的肝素鈉的精制工藝將氧化法及酶解法結合為一體，在粗品肝素鈉中加入蛋白酶對其中含有的蛋白質進行酶解，酶解后采用低溫離心技術出去酸性蛋白，并最后進行一次氧化除雜，使得在除去蛋白質的過程中對肝素總效價的影響達到最低；

2.最后得到的精制肝素鈉產品較白，且效價高達170U/mg以上，回收率高達96％以上。