[發(fā)明專(zhuān)利]一種雜交瘤細(xì)胞株及其產(chǎn)生的單克隆抗體和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810188948.2
• 申請(qǐng)日: 2018-03-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108330101B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭慧君;郭晗璞;李宏梅;張丹丹;胡衛(wèi)國(guó);閆澤一
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 李茜

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種雜交瘤細(xì)胞株及其產(chǎn)生的單克隆抗體和應(yīng)用。本發(fā)明所述的雜交瘤細(xì)胞株的保藏編號(hào)為CGMCC NO.14290。該雜交瘤細(xì)胞株所產(chǎn)生的單克隆抗體能夠識(shí)別A亞群禽白血病病毒gp85囊膜蛋白，可以用于研制A亞群禽白血病的診治試劑或藥物，為A亞群禽白血病的臨床鑒別診斷和實(shí)驗(yàn)室研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雜交瘤細(xì)胞株及其產(chǎn)生的單克隆抗體和 應(yīng)用。

背景技術(shù)

禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus，ALV)屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科，腫瘤病毒亞科，禽 α反轉(zhuǎn)錄病毒屬，可引起禽類(lèi)各種陽(yáng)性或惡性腫瘤。依據(jù)病毒囊膜糖蛋白特性、病毒干擾實(shí)驗(yàn)、宿主范圍等其他分子生物學(xué)特性，將ALV分類(lèi)為11個(gè)亞群,其中A、B、C、D、E、 J、K亞群是從雞中分離得到。A和B亞群是商品蛋雞中最常見(jiàn)的外源性病毒。

A亞群禽白血病(Avian leukosis，AL)是由A亞群禽白血病病毒(ALV-A)引起的 傳染性腫瘤病，主要感染蛋雞，引起蛋雞體免疫力降低、生產(chǎn)性能下降，特別是蛋品質(zhì)及 產(chǎn)蛋率降低。據(jù)報(bào)道，該病污染了國(guó)內(nèi)很多的蛋種雞場(chǎng)，并有一定的上升趨勢(shì)，對(duì)我國(guó)養(yǎng) 禽業(yè)造成嚴(yán)重威脅，給我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。

ALV屬于單股、正鏈、線(xiàn)性RNA病毒，全長(zhǎng)約7.2kb-7.8kb，其本身可直接作為mRNA編碼蛋白質(zhì)，病毒的基因組順序從5'端至3'端依次為5'R-U5-gag-pol-env-U3-R3'。env基因編碼ALV病毒粒子外周蛋白即囊膜蛋白中的gp37和gp85兩種糖蛋白，桿狀結(jié)構(gòu)的gp37 和球狀的gp85通過(guò)二硫鍵和其他非共價(jià)鍵結(jié)合后附著于病毒囊膜上，二者作用較弱，gp85 易從囊膜上掉下使病毒失去感染力。囊膜蛋白的差異決定了ALV亞群的特異性，且各亞 群的病毒env蛋白在不同細(xì)胞表面有其對(duì)應(yīng)的受體，因此ALV的感染具有宿主特異性。

gp85含受體決定簇，決定禽白血病病毒的特異性及中和活性，利用該特點(diǎn)可以鑒定 分析病毒的亞型，亦可采用基因工程獲取gp85蛋白來(lái)制作單抗及亞單位疫苗誘導(dǎo)易感動(dòng) 物產(chǎn)生特異性抗體，為疾病防治提供了理論基礎(chǔ)。

目前，對(duì)于A(yíng)亞群禽白血病病毒感染可通過(guò)臨床剖檢和組織病理學(xué)檢查初步診斷，進(jìn) 一步確診需要通過(guò)PCR，免疫組織化學(xué)，間接免疫熒光和ELISA等方法。PCR方法容易 受到很多因素干擾，并可能出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果；ELISA的方法目前前市場(chǎng)上尚未有 特異性檢測(cè)ALV-A的成品試劑盒，現(xiàn)有的試劑盒為美國(guó)愛(ài)德士公司生產(chǎn)的ALV-A/B抗體 檢測(cè)試劑盒，但是不能區(qū)分樣品中抗體的具體類(lèi)型；免疫組織化學(xué)和間接免疫熒光的方法 也需要高特異性的單克隆抗體。

鑒于以上研究現(xiàn)狀，基于我國(guó)分離毒株制備高特異性的ALV-A病毒單克隆抗體成為 控制和檢測(cè)我國(guó)雞群ALV-A感染的當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種雜交瘤細(xì)胞株及其產(chǎn)生的單克隆抗體， 使所產(chǎn)生的單克隆抗體能夠識(shí)別A亞群禽白血病病毒(ALV-A)gp85囊膜蛋白，可以用于研制診斷與治療A亞群禽白血病的試劑或藥物。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一方面，提供一種雜交瘤細(xì)胞株，保藏編號(hào)為CGMCC NO.14290。

本發(fā)明所述雜交瘤細(xì)胞株由以下方法制備獲得：

利用重組gp85蛋白免疫Balb/C小鼠，取免疫后小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞融合，再進(jìn)行陽(yáng)性克隆與亞克隆的篩選，最終篩選出一株能夠穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，命名為SDAU-ALV-A14GZ，并于2017年6月20日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員 會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院 微生物研究所，保藏編號(hào)為CGMCC NO.14290，分類(lèi)命名為抗ALV-A陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株。