[發明專利]一種檸檬外泌體的修飾方法

有效

• 申請號: 201810188754.2
• 申請日: 2018-03-08
• 公開（公告）號: CN108186772B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 王鶯;肖倩
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K47/60;A61K36/752;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所(普通合伙) 44244
• 代理人: 胡濟元

本發明涉及一種檸檬外泌體的修飾方法，該方法包括以下步驟：(1)按NHS?PEG?VS︰cRGD＝5︰1的質量比取NHS?PEG?VS和cRGD溶于DMF中，然后按NHS?PEG?VS與cRGD的質量之和︰TEA＝6mg︰1μl的質量體積比加入TEA，室溫反應2h，所得反應產物用乙醚洗滌3次，靜置沉淀，取沉淀物真空干燥，得到cRGD?PEG?VS；(2)按cRGD?PEG?VS︰檸檬外泌體＝1mg︰500μl的質量體積比取cRGD?PEG?VS與濃度為500μg/ml的檸檬外泌體混合，加入的碳酸鈉緩沖液調節為PH值為9.0，然后按步驟(1)所用cRGD︰EDC︰NHS＝1︰1︰1的摩爾比加入EDC和NHS，反應過夜，得到PEG?cRGD?檸檬外泌體。本方法所得到的PEG?cRGD?檸檬外泌體可用于制備治療腦膠質瘤藥物。

技術領域

本發明涉及DNA重組，具體涉及植物來源的外泌體及其修飾。

背景技術

腦膠質瘤是最常見的中樞神經系統惡性腫瘤，占原發性惡性腦腫瘤的46.6％，主要為膠質母細胞瘤，多發生于額葉、顳葉和頂葉，五年生存率僅為5.5％。腦膠質瘤具有高度彌散和浸潤性生長的特點，與周圍正常腦組織無明顯分界線，存在手術難以完全切除和術后易復發的問題，目前臨床上腦膠質瘤的標準治療方案是在最大范圍手術全切除的基礎上輔以放射治療和(或)藥物化療，但總體預后并無顯著改善，臨床療效不甚理想。由于血腦屏障的存在，應用于腦膠質瘤治療的藥物較少，因此亟待開發更多的能夠穿越血腦屏障治療腦膠質瘤的新型藥物，這對于延長患者生存期和提高生活質量，具有重要的臨床應用前景和社會意義。

外泌體(exosomes)是由多種活細胞分泌的囊泡小體，具有脂質雙分子層結構，可攜帶大量蛋白質、脂質、mRNA和siRNA，且易與受體細胞融合，研究報道發現外泌體可參與細胞通訊、細胞遷移、血管新生、免疫反應等過程。外泌體的納米尺寸使其在腫瘤部位有增強滲透和滯留效應(EPR)和被動靶向性，同時外泌體在血液循環中性質結構穩定，可應用于腫瘤治療的研究。目前已經針對動物來源的外泌體開展了廣泛的研究，但是動物細胞來源的外泌體提取工藝復雜、成本高、收率低，而且這些外泌體含有與供體細胞一致的脂質、核酸、蛋白和細胞膜受體等，因此在應用過程中也可能引起副反應，存在一定的安全性問題。相比較而言，多汁植物來源的外泌體產量更高，且生物相容性和安全性更為可靠。目前，美國路易斯維爾大學研究團隊Huang-Ge Zhang等人研究發現西柚果汁提取的外泌體產量高達2.21±0.044g/kg，其研究結果表明西柚來源的外泌體可攜帶miRNA或化療藥物，經鼻內給藥可有效抑制小鼠顱內膠質瘤的生長，延長小鼠的生存期(參見Wang,Q.,et al.,Deliveryof therapeutic agents by nanoparticles made of grapefruit-derivedlipids.Nature Communications,2013.4:p.1867.)，這說明植物來源的外泌體能夠穿越血腦屏障，實現腦部藥物輸送。在目前外泌體應用于腦膠質瘤治療的各項研究中，其給藥方式多為原位給藥和鼻內給藥，但是鼻內給藥存在操作困難、給藥劑量較少難以達到治療劑量和易吸入肺等的問題，這些缺點嚴重限制了鼻內給藥方式在動物實驗及臨床治療中的應用。同時有研究發現外泌體經尾靜脈注射后，大部分蓄積在肝臟、脾臟等部位，而很少富集在腫瘤組織，這說明外泌體對腫瘤組織缺乏主動靶向能力，因此提高外泌體的靶向性，增加其通過靜脈給藥途徑穿越血腦屏障的能力顯得尤為重要。