[發(fā)明專利]HFn包載阿霉素的方法及其產(chǎn)物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810188035.0
• 申請(qǐng)日: 2018-03-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110237263B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 閻錫蘊(yùn);范克龍;朱京東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 昆山新蘊(yùn)達(dá)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K47/69
• 分類號(hào): A61K47/69;A61K31/704;A61K47/10;A61K47/26;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京植眾德本知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 16083
• 代理人: 關(guān)巍

本發(fā)明涉及HFn包載阿霉素的方法及其產(chǎn)物。具體而言，本發(fā)明通過(guò)具體探索不同濃度的脲、不同的添加劑、不同的HFn/阿霉素比例和/或不同的孵育條件如孵育溫度、孵育時(shí)間、孵育緩沖液及pH對(duì)HFn包載阿霉素的最佳條件進(jìn)行了探索。利用本發(fā)明所獲得的包載條件，可以方便、快捷、高效、足量地利用HFn包載阿霉素。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及HFn(人H鐵蛋白，即由人鐵蛋白的H亞基自組裝形成的鐵蛋白)包載阿霉素(DOX)的方法及其產(chǎn)物。具體而言，本發(fā)明涉及利用脲或鹽酸胍解聚、復(fù)性HFn并包載阿霉素的方法及產(chǎn)物。

背景技術(shù)

鐵蛋白(ferritin)是參與和維持鐵代謝平衡的重要功能蛋白，它是一類廣泛存在于動(dòng)植物及微生物細(xì)胞中含高鐵量的蛋白質(zhì)。從細(xì)菌到人類，盡管不同生物的鐵蛋白氨基酸序列具有極大的差別，但其結(jié)構(gòu)相似。典型的鐵蛋白結(jié)構(gòu)是由蛋白外殼和鐵內(nèi)核兩部分構(gòu)成，其中蛋白外殼是由24個(gè)亞基自組裝形成的籠狀結(jié)構(gòu)(外徑12nm，內(nèi)徑8nm)，鐵內(nèi)核的主要成分為水鐵礦(5Fe₂O₃·9H₂O)。鐵蛋白外殼通常是由兩種蛋白亞基(H和L)組成。在機(jī)體不同組織和器官中，鐵蛋白分子中含有H和L亞基的比例有所不同。

人H鐵蛋白(HFn)是指由人鐵蛋的H亞基自組裝形成的鐵蛋白。由人鐵蛋白的H亞基可以自組裝形成籠狀蛋白，所包含的人鐵蛋白的H亞基數(shù)目通常為24。人H鐵蛋白的全長(zhǎng)氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

MTTASTSQVRQNYHQDSEAAINRQINLELYASYVYLSMSYYFDRDDVALKNFAKYFLHQSHEEREHAEKLMKLQNQRGGRIFLQDIKKPDCDDWESGLNAMECALHLEKNVNQSLLELHKLATDKNDPHLCDFIETHYLNEQVKAIKELGDHVTNLRKMGAPESGLAEYLFDKHTLGDSDNES(SEQ ID No.1)

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，不同來(lái)源鐵蛋白的藥物裝載，主要依賴于兩種方式：1、藥物在特定處理?xiàng)l件下，通過(guò)鐵蛋白上的離子通道或疏水通道，進(jìn)入蛋白殼內(nèi)部；2、利用低pH值或高濃度脲，使蛋白殼發(fā)生解聚，在隨后的復(fù)聚過(guò)程中加入待包載藥物，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)藥物在蛋白殼內(nèi)部的裝載。上述的包載方法中，尤其以高濃度脲條件下的HFn包載阿霉素效率最高，達(dá)到每分子HFn裝載33分子阿霉素；該方法的簡(jiǎn)要步驟為：將人HFn加入終濃度大于6M的脲中，室溫下反應(yīng)30分鐘，隨后加入適量阿霉素試劑，并避光反應(yīng)10分鐘，然后使用透析的方法，將反應(yīng)體系中的脲濃度逐級(jí)遞減至0，從而實(shí)現(xiàn)阿霉素在HFn中的包載。相比其他包載方法，雖然高濃度脲法有效地提高了阿霉素在HFn中的裝載量，但是距離臨床用藥需求仍有較大的差距，按照1分子鐵蛋白裝載33分子的阿霉素計(jì)算，臨床單次給藥所需的蛋白質(zhì)量就達(dá)到了克級(jí)水平，顯著超出了現(xiàn)有蛋白質(zhì)藥物的最高給藥劑量(百毫克級(jí))。為了滿足臨床用藥需求，本領(lǐng)域必須開(kāi)發(fā)載藥量更大的HFn藥物包載方法。

阿霉素是一種抗腫瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，對(duì)RNA的抑制作用最強(qiáng)，抗瘤譜較廣，對(duì)多種腫瘤均有作用，屬周期非特異性藥物，對(duì)各種生長(zhǎng)周期的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用。主要適用于急性白血病，對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病及粒細(xì)胞白血病均有效，一般作為第二線藥物，即在首選藥物耐藥時(shí)可考慮應(yīng)用此藥。對(duì)于惡性淋巴瘤，可作為交替使用的首選藥物。其對(duì)乳腺癌、肉瘤、肺癌、膀胱癌等其他各種癌癥都有一定療效，多與其他抗癌藥聯(lián)合使用。

但是，阿霉素在直接注射使用時(shí)，由于隨血液全身彌散分布，對(duì)機(jī)體可產(chǎn)生廣泛的生物化學(xué)效應(yīng)，具有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性作用。主要的毒性反應(yīng)有，白細(xì)胞和血小板減少，約60％～80％的病人可發(fā)生；100％的病人有不同程度的毛發(fā)脫落，停藥后可以恢復(fù)生長(zhǎng)；心臟毒性，表現(xiàn)為心律失常，ST-T改變，多出現(xiàn)在停藥后的1～6個(gè)月；惡心、食欲減退；藥物溢出血管外可引起組織潰瘍及壞死。另外，用藥后尿液可出現(xiàn)紅色。

因此，本領(lǐng)域存在對(duì)HFn高效裝載阿霉素的方法及相應(yīng)產(chǎn)物的需求。

發(fā)明內(nèi)容