[發(fā)明專利]一種冰凍組織芯片制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810187609.2
• 申請(qǐng)日: 2018-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN108398303A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張魯彤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西丙申生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;G01N1/42;C12M1/34
• 代理公司: 北京久維律師事務(wù)所 11582
• 代理人: 邢江峰

本發(fā)明提供了一種冰凍組織芯片制備方法，包括芯片微陣列設(shè)計(jì)、取樣、采集組織芯、切片、貼片、干燥、貯存步驟，本發(fā)明應(yīng)用使用自行研制的受體模具所制造的冰凍組織芯塊成功率高，其點(diǎn)與點(diǎn)之間均勻統(tǒng)一，而且操作簡(jiǎn)便，技術(shù)可靠，費(fèi)用低廉，經(jīng)濟(jì)實(shí)用；所取得的冰凍組織芯片，具有體積小，容量大，定位準(zhǔn)確，節(jié)省時(shí)間，節(jié)約成本特點(diǎn)，冰凍組織芯片中信息含量豐富，通過一次試驗(yàn)可以獲得大量研究結(jié)果，可以簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、規(guī)范地進(jìn)行蛋白及基因原位分析，在形態(tài)學(xué)觀察和蛋白表達(dá)方面的研究方面具有良好的應(yīng)用前景和價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因研究技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種冰凍組織芯片制備方法。

背景技術(shù)

組織芯片也稱為組織微陣列(Tissue Microarray)，它是將許多不同組織以規(guī)則陣列排布于同一載玻片上而制成的組織切片，主要用于研究同一種基因或蛋白質(zhì)分子在不同細(xì)胞或組織中表達(dá)的情況，是一種高通量，大樣本以及快速分子水平的分析工具。

冰凍組織芯片與傳統(tǒng)的石蠟包埋的組織芯片相比，可以克服石蠟包埋的組織芯片的多種缺陷，石蠟包埋的組織芯片處理時(shí)，要經(jīng)過組織固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、脫蠟等一系列的石蠟切片的步驟，可能會(huì)對(duì)抗原的性質(zhì)造成影響，冰凍組織芯片能夠較完好地保存細(xì)胞膜表面和細(xì)胞內(nèi)多種酶活性以及抗原的免疫活性，現(xiàn)有技術(shù)對(duì)于冰凍組織芯片研究中，對(duì)于組織芯和OCT融合的問題、溫度、時(shí)間控制的問題、操作過程中組織芯移位變形的問題、組織樣本正確取樣問題以及如何防止脫片的問題均鮮有技術(shù)公開。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述背景技術(shù)所闡述的問題，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種冰凍組織芯片制備方法，應(yīng)用自制模具進(jìn)行冰凍組織芯片的研制，可以簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、規(guī)范地進(jìn)行蛋白及基因原位分析，適用于形態(tài)學(xué)觀察和蛋白表達(dá)方面的研究。

冰凍組織芯片是通過組織細(xì)針打孔的方法，從眾多的組織塊(即供體塊)中采集到數(shù)十至上百的圓柱形小組織(即組織芯)，并將其整齊排列而制成冰凍組織芯片塊，然后對(duì)冰凍組織芯片塊進(jìn)行切片，再將切片轉(zhuǎn)移到載玻片上制成組織芯片。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種冰凍組織芯片制備方法，包括如下步驟：

步驟一、芯片微陣列設(shè)計(jì)，預(yù)先計(jì)劃?rùn)z測(cè)多少樣本，然后相應(yīng)地進(jìn)行設(shè)計(jì)；

步驟二、取樣，在供體塊中采集組織芯，先將供體塊從-70℃冰箱拿出，轉(zhuǎn)移到-20℃溫度中，放置10-15分鐘后再取樣，取樣時(shí)，采用常規(guī)HE染色，形成HE切片，通過顯微鏡檢查，避開組織出血及壞死部位，對(duì)樣本中有代表性的部位進(jìn)行選擇，標(biāo)記并采樣；

步驟三、采集組織芯，根據(jù)相應(yīng)的標(biāo)記位置，采用打孔儀打孔采集組織芯，受體模具預(yù)先放在-70℃溫度里預(yù)冷15-20分鐘，將組織芯轉(zhuǎn)移到受體模具中，并按芯片微陣列設(shè)計(jì)表的位置將組織芯排列在模具中，當(dāng)組織芯排列全部完成后，將OCT化合物迅速加入已排好組織芯的模具中，OCT的量應(yīng)已全部覆蓋組織芯為準(zhǔn)，當(dāng)OCT的顏色由無色變?yōu)榘咨螅^續(xù)在-70℃溫度中停留10-20分鐘，直至組織芯與OCT化合物完全融合制成冰凍組織芯片塊；

步驟四、切片，將已凍結(jié)的組織芯片塊從-70℃溫度中取出，室溫下放置2分鐘后，即可取下受體模具，將冰凍組織芯片塊在-20℃中放置5-10分鐘，然后夾在切片機(jī)上進(jìn)行修正，以修到全部組織完整為止，切片刀角度為2-4度，切片溫度使用恒冷箱切片機(jī)將溫度設(shè)定為零下15-18度；

步驟五、貼片，將切片貼在經(jīng)正電荷處理的載玻片上，使用固定劑固定5分鐘；

步驟六、干燥，在通風(fēng)廚里干燥2-3小時(shí)，即可對(duì)切片進(jìn)行常規(guī)HE染色或免疫組化及原位雜交染色；

步驟七、貯存，在-70℃冰箱保存。

上述技術(shù)方案中，所述步驟四切片時(shí)，應(yīng)當(dāng)避免切片時(shí)出現(xiàn)皺褶，卷邊及裂痕等現(xiàn)象。