[發明專利]一種黑素細胞培養基質

在審

• 申請號: 201810184744.1
• 申請日: 2018-03-06
• 公開（公告）號: CN108467850A
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發明（設計）人: 高文超;樂秀
• 申請（專利權）人: 廣州往圣生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種黑素細胞培養基質，該培養基質可加快刺激黑素細胞增殖、分化及黑素形成。本發明在黑素細胞的基本培養液基礎上添加了強抗炎能力的齊墩果酸，能夠增強刺激黑素細胞，促進其增殖、分化及黑素形成。廣泛適用于黑素細胞在內的多種細胞的原代和繼代培養。

技術領域

發明涉及生物醫藥領域，特別涉及了一種黑素細胞培養基質。

背景技術

黑素細胞（ melanocyte， MC） 體外培養是研究黑素細胞增殖及黑素合成過程、揭示色素沉著異常及色素性疾病的病因、 病理生理等的重要手段。 黑素細胞體外培養的組織主要是人的表皮， 常采用負壓吸引水皰法、包皮環切術等方式獲取。取下的樣本可單獨或聯合使用胰蛋白酶、 乙二胺四乙酸（ EDTA）等進行消化，獲得黑素細胞懸液， 進行培養。

黑素細胞的基本培養液主要提供黑素細胞生長的最低需求， 包括改良 Eagle 培養基（ dulbecco modifedeagle medium， DMEM）、 Ham 培養液、 RPMI1640 培養液等。

齊墩果酸（Oleanolic acid，OA），五環三萜類化合物。齊墩果酸在臨床上用于治療黃疽 型肝炎、慢性遷延性肝炎及慢性活動性肝炎。

正常情況下， 體外培養的黑素細胞生長緩慢、 增殖能力弱， 因此需要在黑素細胞培養基中添加各種因子以刺激黑素細胞增殖、 分化及黑素形成。

發明內容

本發明提供了一種黑素細胞培養基質，該培養基質可加快刺激黑素細胞增殖、 分化及黑素形成。本發明在黑素細胞的基本培養液基礎上添加了強抗炎能力的齊墩果酸，能夠增強刺激黑素細胞，促進其增殖、 分化及黑素形成。廣泛適用于黑素細胞在內的多種細胞的原代和繼代培養。

技術方案如下：

本發明對比常規的黑素細胞培養基和添加齊墩果酸的培養基質，相同的培養條件培養原代黑素細胞。

1.皮膚樣本

包皮環切術獲得樣本。

2.實驗準備：

實驗解剖器材(眼科剪，眼科鑷，手術刀，200目細胞篩)高壓滅菌121℃ 20min

25ml Hu16培養基的配制：

20ng/ml bFGF +10ng/ml CT+ 20μg/ml IBMX

+1*gentamicin

+10%FBS

+1*青鏈霉素溶液

+DMEM/F12

+OA

3.分散消化

用新的眼科剪和眼科鑷將樣本剪碎，約1mm3大小，分別移入含20ml 0.25%胰酶的2支50ml離心管中；置于37℃水浴鍋中，消化20min。

4.培養

消化20min后，200目細胞篩過濾，濾液轉移至新的50ml離心管中，750rpm離心5min，1500rpm離心5min，棄上清。

用0.01MPBS（含1%雙抗）洗滌1次，1500rpm離心5min，棄上清

用完全培養基重懸細胞，接種于6孔板中，于37℃ 5%CO2 95%濕度培養箱中培養并觀察。

培養3天后，加入OA的黑素細胞生長良好，觸角明顯；未加的黑素細胞數量稀少，未發現觸角。