[發(fā)明專利]應用鵝胚傳代細胞系和生物反應器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810184222.1 | 申請日： | 2018-03-06 |
| 公開（公告）號： | CN108220226A | 公開（公告）日： | 2018-06-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 袁十義 | 申請（專利權(quán)）人： | 寧波高新區(qū)綠元匯生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/073 | 分類號： | C12N5/073;C12N5/02;C12N7/00;C12N7/02 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 315040 浙江省寧波*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 病毒 生物反應器培養(yǎng) 傳代 小鵝瘟 獸用生物制品 縮短生產(chǎn)周期 細胞 病毒滴度 工藝步驟 人員配置 污染幾率 懸浮培養(yǎng) 繁殖 收獲 應用 | ||
1. 應用鵝胚傳代細胞系和生物反應器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于包括以下工藝步驟 ：
（1）生物反應器的選擇 ：激流式反應器 AP-20C 型，體積為 10L ；
（2）細胞的選擇 ：鵝胚傳代細胞系 CGBQ ；
（3）病毒毒株的選擇 ：選用小鵝瘟病毒 SHM 319 株 ；
（4）種細胞的培養(yǎng) ：利用 T175 方瓶中的細胞生長液繁殖 CGBQ 細胞，按 1:3 ～ 1:5傳代，待細胞長滿單層后消化、計數(shù)，將細胞懸液接種至轉(zhuǎn)管中，每管接種細胞 3×107 個細胞，置微型反應器中進行培養(yǎng)，反應器溫度設(shè)置為 37℃，轉(zhuǎn)速設(shè)置為 42rpm ；
（5）繁殖病毒用細胞的懸浮培養(yǎng) ：首先準備生物反應器 ：檢漏激流袋和灌注袋 ；采用滅菌PBS浸泡微載體過夜 ；校正溫度電極、pH電極和溶氧電極并進行高壓滅菌 ；組裝生物反應器，注入細胞生產(chǎn)液，循環(huán) 24 小時進行系統(tǒng)的無菌檢驗 ；驗證合格后，將步驟（4）中培養(yǎng)好的種子細胞消化、計數(shù)，無菌條件下按3～6×109個細胞接種至灌注袋中，在溫度37～38℃下，以 40rpm、60rpm、90rpm、120rpm 各循環(huán) 30min，使細胞貼壁，然后開始 150rpm循環(huán) ；培養(yǎng)過程中適時測定糖耗，當殘?zhí)橇恐?2g/L 時，進行補糖或補加培養(yǎng)液 ；
（6）所述步驟（4）和步驟（5）細胞生長液含 90% Ham’s F12K、10% 胎牛血清，細胞生長液的 pH 為 7.0 ～ 7.6，DO 為 30% ～ 60%，含糖 4.0g/L ；
（7）病毒的培養(yǎng)與收獲 ：當細胞培養(yǎng)4～6天，當糖耗達到最大時，將小鵝瘟病毒懸液按0.01 ～ 1.0MOI 的接種量接種于激流灌注式生物反應器中，換用維持液進行培養(yǎng) ；接毒后實時監(jiān)測糖耗情況，當糖耗接近 0 時，即開始收獲病毒 ；收獲病毒后，反復凍融灌注袋內(nèi)細胞，收獲全懸病毒液 ；
（8）所述步驟（7）中的細胞維持液含 97% Ham’s F12K、3% 胎牛血清，維持液的 pH 為7.4 ～ 7.6，DO 為 30% ～ 50%，含糖 4.0g/L。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于寧波高新區(qū)綠元匯生物科技有限公司，未經(jīng)寧波高新區(qū)綠元匯生物科技有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201810184222.1/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
