[發明專利]貉犬瘟熱活疫苗及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810182784.2
• 申請日: 2018-03-06
• 公開（公告）號: CN108295251A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 袁十義
• 申請（專利權）人: 寧波高新區綠元匯生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/175
• 分類號: A61K39/175;A61P31/14;C12N7/00;C12N7/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種貉犬瘟熱活疫苗及其制備方法和應用，屬于獸用生物制品技術領域。本發明的一種貉犬瘟熱活疫苗，其為液體疫苗，其中有效成分為貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株，該弱毒疫苗株是本發明發明人通過貉體連續傳代的方式，從犬瘟熱疫苗株CDV?O2中馴化獲得的一株對貉安全、免疫原性良好、滴度穩定的犬瘟熱弱毒疫苗株，命名為CDV?OR12株，其微生物保藏號為CGMCC NO.13793。實驗證明，該疫苗可有效保護貉免于犬瘟熱病毒強毒的攻擊，保護率在90％以上，能夠有效預防貉犬瘟熱的發生，免疫期為6個月。本發明的提出為貉犬瘟熱的防控提供了一種新的技術手段。

技術領域

本發明涉及一種貉犬瘟熱活疫苗及其制備方法和應用，本發明屬于獸用生物制品。

背景技術

犬瘟熱是由副黏病毒科麻疹病毒屬犬瘟熱病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，幼齡動物多為急性、致死性經過，成年動物可成慢性、持續性感染，臨床癥狀以雙相體溫升高，伴有卡他性肺炎、胃腸炎為主要特征，偶有神經癥狀出現，容易繼發其他細菌病毒的混合感染和二次感染，死亡率可高達80％，是危害我國毛皮動物養殖業的最嚴重的疫病之一，貉犬瘟熱全年任何季節都能夠發生，尤其是仔貉在斷乳前后以及育成期更加敏感，具有非常高的發病率和死亡率，老齡貉具有一定的抵抗力。帶毒動物是貉犬瘟熱的主要傳染源，通過眼及鼻分泌物、唾液、尿、糞便排出病毒，主要經消化道、呼吸道傳染。由于貉犬瘟有發病急、缺乏特效治療方法的特點，貉犬瘟熱仍以疫苗接種作為主要的防控手段，然而目前市場上并沒有貉犬瘟熱疫苗銷售，很多養殖戶以犬、水貂等動物的犬瘟熱疫苗用以預防貉犬瘟熱，無法取得較好的免疫保護效果。因此，開發安全、免疫效果良好的貉犬瘟熱疫苗，不僅是行業和市場的迫切需求，具有廣闊市場應用前景，對于防控貉犬瘟熱具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種貉犬瘟熱活疫苗及其制備方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：本發明通過貉體連續傳代的方式，人工馴化了犬瘟熱疫苗株CDV-O2，獲得了一株對貉安全、免疫原性良好、滴度穩定的貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株CDV-OR12株，并以此毒株制備了貉犬瘟熱活疫苗(液體疫苗)。

本發明的一種貉犬瘟熱活疫苗，為液體疫苗，其有效成分為貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株，所述的貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株，命名為CDV-OR12株，分類命名為犬瘟熱病毒(Canine Distemper Virus)，該疫苗株保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址在北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，微生物保藏號為CGMCC NO .13793，保藏時間為2017年04月21日，在本發明所述的貉犬瘟熱活疫苗中，優選的，所含有的貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株的TCID50≥104 .5/頭份，更優選的，所含有的貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株的TCID50為104 .5-105.5/頭份。

進一步的，本發明還提出了一種制備所述的貉犬瘟熱活疫苗的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)取所述的貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株CDV-OR12株以吸附接毒的方式接種Vero細胞上進行病毒擴增培養，每日觀察細胞病毒情況，待細胞病變達到75-85％時通過反復凍融的方法收獲病毒液，并進行病毒含量、純凈性檢驗；

(2)將檢驗合格的病毒液以無血清的MEM培養液稀釋后，定量分裝，并保存于-20℃，即為貉犬瘟熱活疫苗。

在本發明所述的方法中，優選的，步驟(1)得到的病毒液中貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株的TCID50≥104.5/ml。

在本發明所述的方法中，優選的，制備得到的疫苗成品中貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株的含量TCID50≥104 .5/頭份，更優選的，所含有的貉犬瘟熱病毒弱毒疫苗株的TCID50為104.5-105.5/頭份。

更進一步的，本發明還提出了所述的貉犬瘟熱活疫苗在制備預防貉犬瘟熱藥物中的用途。