[發(fā)明專利]一種以大腸桿菌菌影為載體裝載紫杉醇藥物的制備方法

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• 申請日: 2018-03-06
• 公開（公告）號: CN108324956A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉云;只勇;張震;雷磊;牟婧
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K31/337;A61P35/00
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一種以大腸桿菌菌影為載體裝載紫杉醇藥物的制備方法屬于生物制藥技術(shù)；包括：①、將溫控裂解質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌內(nèi)，培養(yǎng)至對數(shù)生長期進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到無活性大腸桿菌菌影菌液；②、將誘導(dǎo)后無活性大腸桿菌菌影菌液離心處理取沉淀物，將沉淀物制備成無活性大腸桿菌菌影凍干粉；③、將紫杉醇配制成溶液；④、將無活性大腸桿菌菌影凍干粉與紫杉醇溶液共孵育后，離心取沉淀物，得無活性大腸桿菌菌影裝載紫杉醇成份的紫杉醇藥物；本藥物采用無活性的大腸桿菌菌影為紫杉醇藥物的載體，具有良好的緩釋性、靶向性和免疫刺激性，提高了紫杉醇藥物抗癌治療效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)藥物與微生物領(lǐng)域，具體地說，涉及一種以大腸桿菌菌影為載體裝載抗癌藥物的制備方法。

背景技術(shù)

菌影(bacterial ghost BG)是一種由phiX174噬菌體裂解E基因在細(xì)菌體內(nèi)表達(dá)后形成不包含核酸、核糖體以及其他內(nèi)容物的空細(xì)菌體。BG保留了細(xì)菌型態(tài)的同時，也保留了細(xì)菌表面的抗原結(jié)構(gòu)，這使BG可以有效的刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫與細(xì)胞免疫應(yīng)答。裂解E基因表達(dá)形成的蛋白會在細(xì)菌胞膜上留下溶菌孔道，DNA質(zhì)粒或藥物可以通過孔道裝載到BG內(nèi)部，因其所具有的這些特點(diǎn)，菌影具有良好的靶向性。

紫杉醇(PTX)是一種廣泛用于臨床治療卵巢癌和乳腺癌的抗腫瘤藥物。紫杉醇的水溶性差，注射劑型中用經(jīng)純化的聚氧乙烯蓖麻油和USP級的無水乙醇接近等比例的混合溶劑作為溶劑，但是在應(yīng)用過程中，出現(xiàn)神經(jīng)毒性、肝臟毒性等一系列嚴(yán)重的不良反應(yīng)，所以將紫杉醇裝載于適合的載體，以改善藥物溶解性，減少不良反應(yīng)是急需解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一種具有緩釋性、靶向性的以無活性大腸桿菌菌影為載體裝載紫杉醇藥物的制備方法，達(dá)到提高紫杉醇抗腫瘤治療效果的目的。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:一種以大腸桿菌菌影為載體裝載紫杉醇藥物的制備方法，所述方法包括以下步驟：

①、將溫控裂解質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌內(nèi)，在25—30℃、200—220r/min條件下培養(yǎng)至對數(shù)生長期進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，排出內(nèi)容物，保留天然抗原，得到無活性大腸桿菌菌影菌液；

②、將誘導(dǎo)后無活性大腸桿菌菌影菌液離心處理取沉淀物，將沉淀物通過凍干機(jī)加工制備成無活性大腸桿菌菌影凍干粉；

③、將紫杉醇配制成溶液；

④、將無活性大腸桿菌菌影凍干粉與紫杉醇溶液在190—210r/min、室溫22—27℃、避光12h條件下共孵育后，離心取沉淀物，得到無活性大腸桿菌菌影裝載紫杉醇成份的紫杉醇藥物。

本發(fā)明構(gòu)建一種紫杉醇藥物緩釋系統(tǒng)，以大腸桿菌菌影作為一種藥物載體，與傳統(tǒng)的緩釋載體相比，其對腫瘤細(xì)胞具有靶向性，可以增加紫杉醇抗腫瘤效果，這為之后應(yīng)用于臨床提供基礎(chǔ)性理論依據(jù)。

與現(xiàn)有其它類型的藥物載體相比較，本發(fā)明有以下優(yōu)點(diǎn)：所使用的藥物載體為大腸桿菌菌影，其內(nèi)容物排出留有空間裝載藥物且無生命活性，并保留了菌體天然抗原。天然抗原不僅會刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，而且脂多糖(LPS)會與一些癌細(xì)胞表面所表達(dá)的toll樣受體(TLRs)產(chǎn)生結(jié)合與反應(yīng)，這樣也具有了被動的靶向性。水溶性和脂溶性的抗癌藥物都可裝載于無活性大腸桿菌菌影中，因此，具有緩釋性、靶向性和免疫刺激性的紫杉醇藥物緩釋系統(tǒng)具有良好的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1是菌影吸附于MCF—7(MCF—7乳腺腫瘤細(xì)胞)熒光染色圖片；

圖2是藥物釋放曲線圖；

圖3是MCF—7活性抑制柱狀圖。

具體實(shí)施方式

下面對本發(fā)明實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述。一種以大腸桿菌菌影為載體裝載紫杉醇藥物的制備方法，所述方法包括以下步驟：