[發明專利]一種甘草黃酮組分的提取及純化方法

在審

• 申請號: 201810181483.8
• 申請日: 2018-03-05
• 公開（公告）號: CN108261438A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 劉忠英;劉媛媛;韋夢瑩;馬瑩慧
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61K36/484
• 分類號: A61K36/484;A61P29/00
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 魏征驥

本發明涉及一種甘草黃酮組分的提取及純化方法，屬于植物中黃酮類組分的提取及純化方法。以甘草為原料，經蒸餾水提取得到甘草提取液，再經甲醇和乙酸乙酯處理對甘草中黃酮組分粗分離，采用DM130大孔樹脂和聚酰胺樹脂聯合過柱法進行，最后用高效液相?質譜技術對純化的黃酮組分進行成分鑒定。有益效果是：聯合DM130大孔樹脂和聚酰胺樹脂法可將甘草中的黃酮組分較好地分離純化，且將皂苷組分的影響降到最低，利于干草中黃酮組分藥效學等研究；利用液質聯用鑒定純化后的甘草黃酮主要是甘草素葡萄糖芹糖苷、甘草苷、異甘草素葡萄糖芹糖苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素、刺芒柄花素、甘草瑞酮、甘草酸、甘草香豆素。

技術領域

本發明屬于植物中黃酮類組分的提取及純化方法。

背景技術

近年來研究發現，黃酮類化合物具有防癌、抗癌、抗腫瘤、抗氧化、抗炎、抗菌、抗心血管疾病、降血脂、抗骨質疏松、鎮痛、雌性激素樣作用、預防老年癡呆以及調節免疫系統等多方面藥理作用。由于很多植物藥中黃酮類物質的作用機理尚不明確，因此近年來人們對植物藥中黃酮類成分的鑒定以及相關藥理作用的研究越來越重視。

黃酮類化合物種類繁多，泛指兩個苯環(A與B)通過三個C原子相互連接而成的一系列化合物，基本骨架有C6-C3-C6模式，結構如下，主要包括黃酮、黃酮醇、黃烷酮等。

黃酮純化方法較多，目前主要的純化方法有：萃取法、超濾膜法、結晶法和柱層析法等。溶劑萃取法利用相似相溶的原理，將不同極性的黃酮類化合物分離，廣泛地應用于天然產物的研究中，常用的有機試劑有甲醇、乙醇、乙酸乙酯和正丁醇等。超濾膜法是按照相對分子量進行分離的一種方法，可選用合適的超濾膜孔徑，通過物理分離方法，有效地除去提取液中的大分子物質。黃酮類化合物在低溫下水溶解度低，易飽和，因此可以采用結晶法進行分離，設置不同溫度、不同溶劑體系對黃酮類化合物進行分離，但該方法應用較少。最常用的柱層析法為聚酰胺樹脂和大孔樹脂法。黃酮類化合物富含酚羥基，因此可與聚酰胺樹脂中的酰胺基結合。不同化合物與聚酰胺形成的氫鍵締合能力不同，因此聚酰胺樹脂可用來分離純化中藥提取液中的黃酮類化合物。大孔樹脂是一種具有大孔結構、人工合成的有機高分子共聚體，因其多孔結構特點可通過吸附性和篩選性原理相結合分離不同的物質。大孔樹脂的型號種類眾多，功能差異較大，可根據不同物質的理化性質，選擇合適的大孔樹脂進行分離。AB-8、D101、NKA、NKA-9、D152、ADS-17等大孔樹脂均可對黃酮進行篩選純化。

現今有許多化合物檢測技術，包括紫外檢測器、光電二極管陣列檢測器、熒光檢測、蒸發光散射檢測器和質譜(MS)等。與其它檢測技術相比，MS不僅能夠得到化合物的結構信息而且具有更高的靈敏度。近年來隨著軟電離質譜技術的發展，應用質譜技術進行中藥研究的報道越來越多，特別是它與色譜聯用后能夠對復雜的混合物進行分析，這點對于中藥這一復雜體系十分重要。中藥的質譜分析主要是通過對已知化合物進行串聯質譜分析，推斷類似結構化合物的裂解規律，從而對中藥和中藥復方中其它未知結構的化合物進行推斷。黃酮類化合物在串聯質譜中主要發生逆狄爾斯-阿德反應、開環斷裂和糖苷鍵斷裂等反應，通過總結這些反應的規律可以對黃酮類化合物的同分異構體進行區分。

發明內容

本發明提供一種甘草黃酮組分的提取及純化方法，通過設計篩選成熟的工藝步驟和工藝參數，以得到純度高、生物活性好、質量穩定的甘草黃酮產品。

本發明采取的技術方案是：包括下列步驟：

(1).甘草提取液的制備

精密稱取甘草粗提物，9～11倍量蒸餾水浸泡25～35min，回流提取0.5～1.5h，離心分離上清液和藥渣，將藥渣用9～11倍量水回流提取35～45min，離心，合并兩次上清液，將上清液濃縮至0.5g生藥量/mL，加入95％乙醇，使其醇沉溶液終濃度為60％，4℃條件下靜置12h后，4000r/min離心8～12min，將上清液濃縮至干，待用；

(2).甘草提取液的黃酮組分粗分離