[發(fā)明專利]用于檢測多種病原體的試劑盒及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810180332.0
• 申請日: 2018-03-05
• 公開（公告）號: CN108277291A
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許行尚;杰弗瑞·陳;王龍;于沛;張蓉蓉
• 申請（專利權(quán)）人: 南京嵐煜生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 南京正聯(lián)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32243
• 代理人: 陸中丹

本發(fā)明公開了一種用于檢測肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團(tuán)菌的試劑盒包括含有檢測試劑的檢測管、陽性質(zhì)控品和和無RNase水組成；其中，檢測試劑單管分裝，為干粉形態(tài)，包括有肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團(tuán)菌的特異性保守序列的引物及Taqman熒光探針。可對肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團(tuán)菌進(jìn)行快速準(zhǔn)確檢測，且能在各種環(huán)境中簡便易用，保證了檢測的時效性、特異性和靈敏度；針對肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團(tuán)菌各自的保守序列上設(shè)計特異性引物探針，可以同時檢測并區(qū)分出肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團(tuán)菌；解決了低溫保存和使用操作繁瑣的問題，檢測試劑可在4℃低溫或常溫下保存，使用時僅需加入提取好的核酸樣本即可上機檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團(tuán)菌的試劑盒及其使用方法。

背景技術(shù)

肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,MP)、肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae,CP)和嗜肺軍團(tuán)菌(Legionella pneumoniae,LP)感染是全球重要的感染性疾病，可在各年齡組兒童發(fā)病，以呼吸道感染最為常見，感染部位可貫穿整個呼吸道，且具有一定的傳染性。MP、CP、LP是兒童急性上呼吸道感染常見的致病菌，也是引起社區(qū)獲得性肺炎的主要病原菌。三種病原菌引起的肺炎支原體肺炎、肺炎衣原體肺炎和嗜肺軍團(tuán)菌肺炎為非典型肺炎，在癥狀、體征及輔助檢查方面無特異性，病原體檢測有局限性，易于誤診，利用分子技術(shù)可以快速、準(zhǔn)確地進(jìn)行診斷，從而配合正確的治療，減少抗菌藥物的濫用。由這三種病原體引起的呼吸道感染所占比重較高，且三者的混合感染也日漸增多，同時檢測、快速檢測三種病原體的產(chǎn)品越來越有需求。

肺炎支原體是無細(xì)胞壁，介于病毒和細(xì)菌之間能自我復(fù)制進(jìn)行獨立生活的最小微生物，革蘭氏染色陰性。MP可以引起支原體肺炎、上呼吸道感染、支氣管炎、肺膿瘍、免疫性溶血性貧血、腦膜腦炎、心肌炎、心包炎、腎炎、社區(qū)獲得性肺炎等疾病。MP有很強的傳染性，主要由口、鼻分泌物以氣溶膠微粒的形式通過呼吸道傳播，其潛伏期較長，存在全年散發(fā)、秋冬季高發(fā)的特點，會小范圍內(nèi)流行，引起集體感染，如幼兒園、學(xué)校、家庭成員交叉感染等。文獻(xiàn)報道的陽性檢出率達(dá)到15％～35％，另外，15％～20％社區(qū)獲得性肺炎是由肺炎支原體引起的，在兒童社區(qū)獲得性肺炎中更是占到20％左右。

肺炎衣原體是介于病毒與細(xì)菌之間的專屬細(xì)胞內(nèi)寄生的病原體，在宿主細(xì)胞內(nèi)生長、繁殖和形成包涵體。傳染途徑與MP一樣是通過呼吸道分泌物在人-人之間傳播，在半封閉環(huán)境可存在小范圍流行。根據(jù)遺傳學(xué)和生物學(xué)分為TWAR、考拉和馬3個生物變種，代表株為TW-183T(ATCC VR 2282T)，是一種常見的人類呼吸道致病菌。CP可以引起急性呼吸道感染如咽炎、喉炎、鼻竇炎中耳炎、支氣管炎及肺炎等，以肺炎最常見，支氣管炎次之；還可以引起心肌炎、心內(nèi)膜炎、動脈硬化和冠心病、虹膜炎、肝炎、腦膜炎和關(guān)節(jié)炎等疾病。潛伏期約為10天，一年四季均可感染，其流行可呈散發(fā)性或爆發(fā)性傳播，尤其在空間相對封閉、人群聚集較多、空氣不太流通的公共場所，文獻(xiàn)報道的陽性檢出率5％～20％。目前的診斷主要靠病原體的分離和血清學(xué)抗體的檢測，但時間長、操作復(fù)雜，而熒光PCR檢測可用于急性感染診斷及特殊人群流行病學(xué)研究。