[發明專利]用于加工含有活細胞的生物藥物的方法

有效

• 申請號: 201810178504.0
• 申請日: 2012-05-02
• 公開（公告）號: CN108261423B
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 邁克爾·哈-諾伊
• 申請（專利權）人: 免疫創新治療有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種體外加工生物藥物組合物的方法，所述生物藥物組合物含有用于在免疫治療中使用的活細胞，其中所述活細胞是通過抗-CD3和抗-CD28單克隆抗體包被的微珠與細胞表面部分交聯而已經被激活的激活態T細胞（CAC），所述方法包括：

以培養基洗滌所述CAC細胞，隨后進行第一離心以去除上清液并且將所述CAC細胞以第一所需濃度重新懸浮在培養基中，其中將細胞活力大于80%的重新懸浮的CAC細胞用于細胞的再激活和配制；

用所述抗-CD3和抗-CD28單克隆抗體包被的微珠再激活重新懸浮的CAC細胞并且孵育足以再激活的時間；

將再激活的CAC細胞配制在無營養緩沖液P1asma-Lyte A中，隨后進行第二離心以去除上清液并且重新懸浮于所述非營養緩沖液P1asma-Lyte A中，從而獲得在配制緩沖液中的細胞（CFB）；

將所述CFB細胞以第二所需濃度重新懸浮在所述非營養緩沖液P1asma-Lyte A中；

使交聯有包被在所述微珠上的所述抗-CD3和抗-CD28單克隆抗體的重新懸浮的CFB細胞維持在儲存溫度低于20℃的所述無營養緩沖液P1asma-Lyte A中超過6小時，

其中維持在所述無營養緩沖液P1asma-Lyte A中的活細胞維持其在配制于所述無營養緩沖液P1asma-Lyte A中前的特性和定義所述活細胞的至少一種功能性特征，所述活細胞在被儲存于所述無營養緩沖液P1asma-Lyte A中超過6小時后可用于免疫治療，

其中在儲存后所述活細胞表達CD40L，所述CD40L的表達量為相對于配制時CD40L的表達量的至少80%，和

在儲存后所述活細胞分泌細胞因子，分泌的細胞因子是IFN-γ，并且分泌的IFN-γ的含量為相比于配制時IFN-γ含量的至少80%。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述儲存溫度在0℃和10℃的范圍內。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述活細胞的所述第一所需濃度和所述第二所需濃度為10⁶個細胞/毫升以上，和/或所述活細胞被置于軟質容器或注射器中，其中所述軟質容器或注射器被包裝于使所述活細胞維持在所述儲存溫度范圍內的溫度控制裝置中。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述活細胞為被固定化抗-CD3和抗-CD28單克隆抗體包被的微珠激活的Th1細胞，其中所述抗-CD3和抗-CD28單克隆抗體是交聯的。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述活細胞還表達FasL、穿孔素和粒酶B，表達共刺激分子，表達粘附分子，分泌趨化因子或其組合。

6.根據權利要求1所述的方法，其中儲存后的IFN-γ的分泌在37℃下孵育至少24小時后恢復。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述無營養緩沖液P1asma-Lyte A中的所述活細胞穩定至少72小時。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-CD3和抗-CD28單克隆抗體包被的微珠是Dynabeads ClinExVivo^TM CD3/CD28。