[發明專利]接枝共聚制備抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜及細菌檢測的方法

在審

• 申請號: 201810178370.2
• 申請日: 2018-03-05
• 公開（公告）號: CN108508003A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 魯振坦;王棟;余振國;黃煜;劉軻
• 申請（專利權）人: 武漢紡織大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/64;C08J7/16;C08L23/06;C08L29/04
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

1.一種接枝共聚制備抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜的方法，其特征在于：它包括如下步驟：

a)制備表面活化的納米纖維膜：取納米纖維膜浸漬于氫氧化鈉溶液中活化處理得到表面活化的納米纖維膜；

b)制備表面具有引發原子轉移自由基的納米纖維膜：取步驟a)得到的所述表面活化的納米纖維膜與溴異丁酰溴反應得到表面具有引發原子轉移自由基的納米纖維膜；

c)制備表面接枝聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯的納米纖維膜：取步驟b)得到的所述表面具有引發原子轉移自由基的納米纖維膜與甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯發生接枝共聚反應，制備得到表面接枝聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯的納米纖維膜；

d)制備異硫氰酸熒光素的牛血清蛋白溶液；

e)制備抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜：取步驟c)得到的所述表面接枝聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯的納米纖維膜浸漬于步驟d)的所述異硫氰酸熒光素的牛血清蛋白溶液中，得到抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜。

2.根據權利要求1所述接枝共聚制備抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟c)的具體反應過程如下：

所述表面具有引發原子轉移自由基的納米纖維膜與溴化亞銅混合后，在惰性氣體環境中，與甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯、二聯吡啶的甲醇混合液，在80℃的恒溫水浴下振蕩反應10～20h，制備得到表面接枝聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯的納米纖維膜。

3.根據權利要求2所述接枝共聚制備抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟c)中，所述溴化亞銅與甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯、二聯吡啶之間的物質的量之比為0.5～2:50～200:0.5～2。

4.根據權利要求1所述接枝共聚制備抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟d)的異硫氰酸熒光素的牛血清蛋白溶液的制備過程如下：

取異硫氰酸熒光素和牛血清蛋白混合后置于水中，所述異硫氰酸熒光素與牛血清蛋白的質量比為4～8:100，控制溫度為4℃，攪拌反應4～6h，去除未反應完全的異硫氰酸熒光素后調節溶液的pH為7～9，得到被異硫氰酸熒光素標記的牛血清蛋白水溶液。

5.根據權利要求1所述接枝共聚制備抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟e)的具體反應過程如下：

取步驟c)得到的所述表面接枝聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯的納米纖維膜浸漬于步驟d)的所述異硫氰酸熒光素的牛血清蛋白溶液中，控制溫度為4℃，反應10～20min，取出，采用清水洗滌至少2次，干燥后制備得到抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜。

6.根據權利要求1所述接枝共聚制備抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟a)中，所述納米纖維膜的厚度為100～300μm，克重為12～40gsm，所述納米纖維膜的材質為聚乙烯-聚乙烯醇。

7.一種接枝共聚制備的抗蛋白干擾能力的細菌檢測膜，其特征在于：它為權利要求1～6中任意一項所述的制備方法制備得到。

8.一種細菌檢測的方法，其特征在于：它包括如下步驟：

1)選用所述權利要求7的細菌檢測膜；

2)將所述步驟1)的檢測膜浸入待測溶液中；

3)待5分鐘后觀察膜的顏色，通過肉眼觀察膜顏色的變化來判斷細菌的濃度：若膜顏色為無色，細菌的總數大于10⁵CFU/mL；若膜顏色為淺黃綠色，細菌的總數為10³～10⁴CFU/mL；若膜顏色為深黃綠色，細菌的總數為10～10³CFU/mL；若膜顏色在黃綠色基礎上顯橙色，細菌的總數為小于10CFU/mL。