[發明專利]一種人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白及其應用

在審

• 申請號: 201810178329.5
• 申請日: 2018-03-05
• 公開（公告）號: CN108410844A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 張耀洲;吳玉乾;馮建華;李冬梅;張樹軍;陳玉皎;王文雅
• 申請（專利權）人: 天津市湖濱盤古基因科學發展有限公司
• 主分類號: C12N9/48
• 分類號: C12N9/48;C12N15/57;C12Q1/6886;C40B40/08;C07K16/40;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/573
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本發明涉及一種人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白及其應用，通過將大量癌癥患者作為研究病例，對病例進行基因檢測并分析，確定出人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白，根據該人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白制備基因芯片、單克隆抗體和ELISA試劑盒，為癌癥的基因診斷提供指引作用，并為實現癌癥的診斷和治療提供理論基礎。

技術領域

本發明涉及一種基因工程領域，尤其涉及一種人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白及其應用。

背景技術

泛素-蛋白酶體系統通過調控關鍵蛋白的泛素化和去泛素化介導多種細胞活動。泛素羧基末端水解酶在多種腫瘤組織中異常表達，作為去泛素化酶家族成員，可移除泛素化蛋白上的泛素分子，從而介導腫瘤發生中關鍵蛋白的泛素化水平，參與多種腫瘤的發生發展過程。

人的泛素羧基末端水解酶4與癌癥的發生和發展密切相關。在對某些肺癌、肝癌和乳腺癌患者的外周血進行基因測序的過程中，均發現患者的泛素羧基末端水解酶4發生了突變，因此，對人的泛素羧基末端水解酶4突變的檢測對判斷人體是否患有相關癌癥具有一定的指引作用。

發明內容

本發明目的在于提供一種人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白及其應用。

本發明技術方案包括：

第一方面，提供一種人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。

第二方面，提供一種人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白的編碼基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

第三方面，提供一種基因芯片，包括：固相載體和固定在該載體上的核苷酸探針；所述核苷酸探針根據所述人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白的核苷酸序列，與人的泛素羧基末端水解酶4正常蛋白的核苷酸序列的比對結果確定。

優選地，所述核苷酸探針為SEQ ID NO:3所示的堿基序列。

第四方面，提供一種特異性識別人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白的單克隆抗體，其編碼的氨基酸序列為SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一種用于檢測人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白的抗體的ELISA試劑盒，所述ELISA試劑盒包括：包被有上述單克隆抗體的ELISA酶標板、酶標二抗、檢測對象的泛素羧基末端水解酶4蛋白、樣品稀釋液、包被緩沖液、ELISA酶標板洗滌液、顯色液和終止液。

優選地，所述酶標二抗為稀釋的HRP辣根過氧化物酶標記的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一種基于上述任一所述ELISA試劑盒檢測人的泛素羧基末端水解酶4突變蛋白的抗體的方法，包括：

a、使用所述包被緩沖液對上述單克隆抗體進行稀釋，并將稀釋后的所述單克隆抗體加樣至ELISA酶標板的孔中，室溫孵育；

b、使用所述樣品稀釋液將檢測對象的泛素羧基末端水解酶4蛋白稀釋成不同濃度梯度，并將不同濃度梯度的泛素羧基末端水解酶4蛋白分別加樣至ELISA酶標板的孔中，室溫孵育；

c、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標板洗滌液，洗滌并甩干；

d、加入所述酶標二抗，并室溫孵育；

e、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標板洗滌液，洗滌并甩干；

f、加入所述顯色液，室溫避光孵育，并加入所述終止液終止反應；

g、在酶標儀上測定波長為450nm處的吸光值。

優選地，進一步包括：空白對照實驗。