[發明專利]一種包膜病毒顆粒的分離方法及組合物

有效

• 申請號: 201810177436.6
• 申請日: 2018-03-02
• 公開（公告）號: CN108531463B
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 廣州瑞貝斯藥業有限公司;廣州銀河陽光生物制品有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 許飛;鄭瑩

1.一種用于分離包膜病毒顆粒的方法，包括將病毒液進行陰離子交換層析和羥基磷灰石層析操作，其中，陰離子交換層析在羥基磷灰石層析之前進行；陰離子交換層析和羥基磷灰石層析之間沒有中間層析操作，其特征在于，

陰離子交換層析包括：

a)上樣操作：將病毒液上樣至離子交換層析柱；

b)洗脫操作：使用離子交換洗脫液對離子交換層析柱進行洗脫；

羥基磷灰石層析包括：

a)上樣操作：將經過陰離子交換層析后的樣液上樣至羥基磷灰石層析柱；

b)洗脫操作：使用羥基磷灰石洗脫液對羥基磷灰石層析柱進行洗脫；

離子交換洗脫液和羥基磷灰石洗脫液的pH值獨立為7.0～9.5，獨立為磷酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、Tricine緩沖液、Hepes緩沖液、甘氨酸緩沖液、TEA緩沖液或巴比妥鈉緩沖液，緩沖液中離子的濃度為1～50mM；

離子交換洗脫液中進一步添加有濃度為50～1000mM的鹽；

羥基磷灰石洗脫液中進一步添加有濃度為1～500mM的鹽。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，進一步包括使用第二離子交換洗脫液對離子交換層析柱進行洗脫。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，分別收集洗出的第一離子交換洗脫液和第二離子交換洗脫液，獲得不同結構、組成或純度的病毒顆粒。

4.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，進一步包括使用第二羥基磷灰石洗脫液對羥基磷灰石層析柱進行洗脫。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，分別收集洗出的第一羥基磷灰石洗脫液和第二羥基磷灰石洗脫液，獲得不同結構、組成或純度的病毒顆粒。

6.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，離子交換洗脫液和羥基磷灰石洗脫液為磷酸緩沖液。

7.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，包膜病毒包括狂犬病毒、流感病毒、乙型腦炎病毒、麻疹病毒、風疹病毒、水痘病毒、腮腺炎病毒、登革熱病毒和艾滋病毒。

8.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，陰離子交換層析進一步包括以下操作中的至少一個：

預平衡操作：包括使用離子交換預平衡液對離子交換層析柱進行預平衡；

平衡操作：包括使用離子交換平衡液對離子交換層析柱進行平衡；

預洗脫操作：包括使用離子交換預洗脫液對離子交換層析柱進行預洗脫；

其中，離子交換預平衡液、離子交換平衡液和離子交換預洗脫液的pH值獨立為7.0～9.5，獨立為磷酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、Tricine緩沖液、Hepes緩沖液、甘氨酸緩沖液、TEA緩沖液或巴比妥鈉緩沖液，緩沖液中離子的濃度為1～50mM；

離子交換預平衡液中進一步添加有濃度為1～500mM的鹽；

離子交換平衡液中進一步添加有濃度為1-500mM的鹽；

離子交換預洗脫液中進一步添加有濃度為1～700mM的鹽。

9.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，羥基磷灰石層析進一步包括以下操作中的至少一個：

預平衡操作：包括使用羥基磷灰石預平衡液對羥基磷灰石層析柱進行預平衡；

平衡操作：包括使用羥基磷灰石平衡液對羥基磷灰石層析柱進行平衡；

預洗脫操作：包括使用羥基磷灰石預洗脫液對羥基磷灰石層析柱進行預洗脫；

其中，羥基磷灰石預平衡液、羥基磷灰石平衡液和羥基磷灰石預洗脫的pH值獨立為7.0～9.5，獨立為磷酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、Tricine緩沖液、Hepes緩沖液、甘氨酸緩沖液、TEA緩沖液或巴比妥鈉緩沖液，緩沖液中離子的濃度為1～50mM；

羥基磷灰石預平衡液中進一步添加有濃度為1～500mM的鹽；

羥基磷灰石平衡液中進一步添加有濃度為1～500mM的鹽；

羥基磷灰石預洗脫液中進一步添加有濃度為1～200mM的鹽。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，羥基磷灰石層析進一步包括以下操作中的至少一個：

預平衡操作：包括使用羥基磷灰石預平衡液對羥基磷灰石層析柱進行預平衡；

平衡操作：包括使用羥基磷灰石平衡液對羥基磷灰石層析柱進行平衡；

預洗脫操作：包括使用羥基磷灰石預洗脫液對羥基磷灰石層析柱進行預洗脫；

其中，羥基磷灰石預平衡液、羥基磷灰石平衡液和羥基磷灰石預洗脫的pH值獨立為7.0～9.5，獨立為磷酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、Tricine緩沖液、Hepes緩沖液、甘氨酸緩沖液、TEA緩沖液或巴比妥鈉緩沖液，緩沖液中離子的濃度為1～50mM；

羥基磷灰石預平衡液中進一步添加有濃度為1～500mM的鹽；

羥基磷灰石平衡液中進一步添加有濃度為1～500mM的鹽；

羥基磷灰石預洗脫液中進一步添加有濃度為1～200mM的鹽。