[發(fā)明專利]用于固定蛋白的化合物和固定蛋白的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810175324.7
• 申請(qǐng)日: 2018-03-02
• 公開（公告）號(hào): CN110218228B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘崢?gòu)?/a>;王夏峰;郭天林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)深圳研究生院
• 主分類號(hào): C07F9/6561
• 分類號(hào): C07F9/6561;C07K17/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 周齊宏

用于固定蛋白的化合物和固定蛋白的方法。所述化合物具有式I的結(jié)構(gòu)，其能夠通過位置選擇性共價(jià)鍵合的方式共價(jià)固定蛋白，特別是sjGST?標(biāo)簽化的蛋白。(式I)其中，R₁是C₁?C₁₂亞烷基，優(yōu)選C₃?C₆亞烷基；R₂是C₁?C₁₀烷基，優(yōu)選C₁?C₃烷基；R₃是H或CH≡C?(C₀?C₁₀)烷基，優(yōu)選CH≡C?(C₀?C₂)烷基，更優(yōu)選CH≡C?。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于固定蛋白的化合物以及一種用于固定蛋白的方法。

背景技術(shù)

將蛋白固定到如微陣列、芯片和珠等固體載體上是一種用于闡明蛋白-蛋白或蛋白-配體相互作用以及用于以高處理量的方式探測(cè)新蛋白功能的強(qiáng)大方法。不同于DNA微陣列的情況，由于在實(shí)現(xiàn)將蛋白選擇性地且均勻取向地分布到固體表面中的固有困難，實(shí)施用于蛋白固定的通用方法存在著挑戰(zhàn)。

常規(guī)固定方法主要依賴三種機(jī)理：物理連接、共價(jià)鍵合和生物親和性固定。然而非選擇性的物理連接或共價(jià)鍵合可能阻塞活性部位或甚至使蛋白變性。通過重組融合標(biāo)簽和所偶聯(lián)蛋白的共表達(dá)進(jìn)行固定可以相應(yīng)保證蛋白的確切取向并且提供了微調(diào)生物結(jié)合物拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的靈活性。例如，將sjGST標(biāo)簽固定到GSH-結(jié)合的聚合物珠或?qū)is-標(biāo)簽固定到Ni-NTA芯片或?qū)⑸锼?標(biāo)簽結(jié)合到鏈霉親和素涂布的固體載體上已經(jīng)被廣泛地選作非共價(jià)蛋白固定方法用于保持所標(biāo)簽蛋白的活性。

因此開發(fā)一種有效且穩(wěn)定的固定蛋白的策略，能夠最大限度地保持活性，是有著顯著意義和應(yīng)用價(jià)值。位置選擇性共價(jià)固定蛋白最近引起很多關(guān)注，因?yàn)樗軌蚍€(wěn)定地、均勻地且高密度地固定各種蛋白。其方法是將所關(guān)注的蛋白與標(biāo)簽蛋白共表達(dá)，再利用后者與其被固定的底物分子共價(jià)地且選擇性地反應(yīng)。比如，Kindermann等報(bào)道了一種通過不可逆地將O6-芐基鳥嘌呤衍生物的烷基連接到hAGT半胱氨酸殘基之一來固定hAGT-標(biāo)簽的共價(jià)方法。

GST-標(biāo)簽蛋白具有高底物親合性，然而，已知的GST標(biāo)簽固定方法仍然基于可逆的GSH-GST結(jié)合，限制了它們的應(yīng)用。

仍然亟需一類這樣的小分子物質(zhì)，其能夠通過位置選擇性共價(jià)鍵合的方式共價(jià)固定蛋白，特別是sjGST-標(biāo)簽化的蛋白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一類具有氟膦酸酯基團(tuán)和炔基端基的小分子物質(zhì)，其能夠通過位置選擇性共價(jià)鍵合的方式共價(jià)固定蛋白，特別是sjGST-標(biāo)簽化的蛋白。

本發(fā)明的目的還在于提供一類能夠以相對(duì)簡(jiǎn)單的方法合成的具有氟膦酸酯基團(tuán)和炔基端基的小分子物質(zhì)，當(dāng)用它們處理sjGST-標(biāo)簽化的蛋白時(shí)能夠共價(jià)地、選擇性地、不可逆地標(biāo)記sjGST。

具體來說，本發(fā)明提供了下述技術(shù)方案：

技術(shù)方案1.式I的化合物：

其中，

R₁是C₁-C₁₂亞烷基，優(yōu)選C₃-C₆亞烷基；

R₂是C₁-C₁₀烷基，優(yōu)選C₁-C₃烷基；

R₃是H或CH≡C-(C₀-C₁₀)烷基，優(yōu)選CH≡C-(C₀-C₂)烷基，更優(yōu)選CH≡C-。