[發明專利]一種牦牛和黃牛肉源性鑒別方法及其鑒別試劑盒在審
| 申請號： | 201810170070.X | 申請日： | 2018-03-01 |
| 公開（公告）號： | CN108118096A | 公開（公告）日： | 2018-06-05 |
| 發明（設計）人： | 郭婷婷;牛春娥;楊博輝;袁超;岳耀敬;郭健;劉建斌;馮瑞林;孫曉萍 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 劉奇 |
| 地址： | 730000 甘肅*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鑒別 牦牛 電泳檢測 牛肉 待測樣品 擴增產物 酶切 限制性內切酶 鑒別試劑盒 鑒別引物 酶切產物 食品檢測 數目判斷 普適性 有效地 總DNA 條帶 近似 物種 檢測 | ||
1.一種牦牛和黃牛肉源性鑒別方法，包括以下步驟：
(1)提取待測樣品的總DNA，采用鑒別引物對總DNA進行PCR擴增，得到擴增產物；
所述鑒別引物由上游引物和下游引物組成，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述下游序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
(2)采用限制性內切酶BspH I對所述步驟(1)得到的擴增產物進行酶切，得到酶切產物；
(3)對所述酶切產物進行電泳檢測，
當酶切產物的電泳圖出現兩個條帶，表示待測樣品為牦牛肉；
當酶切產物的電泳圖僅出現一個條帶，表示待測樣品為黃牛肉；
當酶切產物的電泳圖出現三個條帶，表示待測樣品為牦牛肉和黃牛肉的混合物。
2.根據權利要求1所述牦牛和黃牛肉源性鑒別方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系包括：
以10μL體系計，上游引物0.4～0.6μL、下游引物0.4～0.6μL、樣品總DNA 1.5～2.5μL、2×TaqMix 4～6μL和余量的ddH2O。
3.根據權利要求2所述牦牛和黃牛肉源性鑒別方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系為：
以10μL體系計，上游引物0.5μL、下游引物0.5μL、樣品總DNA 2μL、2×Taq Mix 5μL和ddH2O 2μL。
4.根據權利要求1～3任意一項所述牦牛和黃牛肉源性鑒別方法，其特征在于，步驟(2)所述酶切的反應條件為：溫度35～40℃，反應時間0.5～2h。
5.根據權利要求4所述牦牛和黃牛肉源性鑒別方法，其特征在于，所述酶切中，擴增產物與所述限制性內切酶BspH I的體積比為8～15:1。
6.根據權利要求1～3任意一項所述牦牛和黃牛肉源性鑒別方法，其特征在于，步驟(3)所述電泳檢測方法為聚丙烯酰胺凝膠電泳法。
7.根據權利要求1或2所述牦牛和黃牛肉源性鑒別方法，其特征在于，所述步驟(3)中，當酶切產物的電泳圖出現兩個條帶，并且兩個條帶大小分別為49bp和40bp時，表示待測樣品為牦牛肉。
8.根據權利要求1或2所述牦牛和黃牛肉源性鑒別方法，其特征在于，所述步驟(3)中，當酶切產物的電泳圖僅出現一個條帶，并且條帶大小為89bp時，表示待測樣品為黃牛肉。
9.根據權利要求1或2所述牦牛和黃牛肉源性鑒別方法，其特征在于，所述步驟(3)中，當酶切產物的電泳圖出現三個條帶，并且條帶大小為40bp、49bp和89bp時，表示待測樣品為牦牛肉和黃牛肉的混合物。
10.一種用于牦牛和黃牛肉源性鑒別的鑒別試劑盒，包括鑒別引物、2×Taq Mix、ddH2O、限制性內切酶BspH I以及電泳試劑，
所述鑒別引物由上游引物和下游引物組成，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述下游序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
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