[發(fā)明專利]一種高純度DNA或RNA的快速提取試劑盒及其提取方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810169271.8
• 申請日: 2018-02-28
• 公開（公告）號: CN108342383A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發(fā)明（設計）人: 唐榮;龐雨辰;吳丹;朱天慈;唐勛
• 申請（專利權）人: 默禾醫(yī)療科技(上海)有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京君泊知識產權代理有限公司 11496
• 代理人: 王程遠

1.一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1樣本裂解：

將生物樣品加入裂解液中，使用渦旋混勻器混合均勻，混合速度為2000～2500轉/分鐘，用時30-60秒；接下來加入磁珠懸浮液，直接將裂解釋放的DNA與磁珠攪拌均勻，攪拌速度為2000～2500轉/分鐘，制得磁珠-DNA懸浮液，該步驟用時10-15分鐘；

S2洗滌：

將步驟S1制得的磁珠-DNA懸浮液用洗液I和洗液II進行先后洗滌，去除裂解液中的鹽和細胞破裂釋放的蛋白質，洗滌時都使用渦旋混勻器，速度為2000～2500轉/分鐘，每次洗滌混勻時間都為60秒，洗液I洗滌用時2-3分鐘，洗液II用時4-5分鐘，洗滌步驟共用時6-8分鐘，制得新磁珠-DNA懸浮液；

S3洗脫：

將步驟S2制得的新磁珠-DNA懸浮液使用洗脫液將結合在磁珠表面的DNA洗脫下來，洗脫時使用渦旋混勻器振蕩，速度為2000～2500轉/分鐘，振蕩時間為5-10分鐘，制得高純度DNA樣本，該步驟用時8-12分鐘。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，所述裂解液包含1-10M細胞裂解劑，0.5％-2％表面活性劑，10-40mM螯合劑，0.1-20M鹽緩沖液，10-100mM的PH緩沖劑，PH范圍為7.5-9。

3.根據(jù)權利要求2所述的一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，所述細胞裂解劑優(yōu)選濃度為5-7M，包括但不限于使用鹽酸胍、異硫氰酸胍、硝酸胍、磷酸胍、碳酸胍，優(yōu)選為異硫氰酸胍或者鹽酸胍。

4.根據(jù)權利要求2所述的一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，所述表面活性劑用于溶解細胞膜蛋白從而破壞細胞膜，并溶解細胞中的核蛋白，優(yōu)選濃度為1％-3％，包括但不限于使用十二烷基硫酸銨、十二烷基醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、十二烷基磷酸酯、聚乙二醇對異辛基苯基醚。優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉或十二烷基醇聚氧乙烯醚硫酸鈉。

5.根據(jù)權利要求2所述的一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，所述螯合劑用于螯合Mg²⁺、Ca²⁺金屬離子，優(yōu)選濃度為15-35mM，包括但不僅限于乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、檸檬酸、葡萄糖酸、氨基三乙酸等，優(yōu)選為乙二胺四乙酸或檸檬酸。

6.根據(jù)權利要求2所述的一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，所述鹽緩沖液優(yōu)選濃度為0.5-10M，包括但不僅限于使用氯化銨、碳酸氫銨、硫酸銨、硝酸銨、亞硫酸銨，優(yōu)選為氯化銨或硫酸銨。

7.根據(jù)權利要求2所述的一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，所述PH緩沖液優(yōu)選濃度為40-70mM，優(yōu)選PH范圍為7.5-9，包括但不限于Tris-HCl、Tris-Ac、Tris-SO₄，優(yōu)選為Tris-HCl或Tris-Ac。

8.根據(jù)權利要求1所述的一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，所述洗液I包含有5-9M細胞裂解劑、10-35mM螯合劑、50-70mM的PH緩沖劑，所有試劑優(yōu)選范圍與裂解液相同；所述洗液II中含有1-100mM PH緩沖液，優(yōu)選范圍為：80-100mM、1-50mM螯合劑，優(yōu)選范圍為：5-25mM、70％-90％核酸沉淀劑，溶液PH范圍為：6-7。

9.根據(jù)權利要求8所述的一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，所述核酸沉淀劑優(yōu)選濃度為：80％-90％，包括但不限于：無水乙醇、異丙醇，優(yōu)選為無水乙醇；所述洗脫液中，含有1-100mM的PH緩沖液,優(yōu)選范圍為：80-100mM、1-50mM的螯合劑，優(yōu)選范圍為：5-25mM，溶液PH范圍6-9。

10.根據(jù)權利要求1所述的一種高純度DNA或RNA的快速提取方法，其特征在于，還包括樣本為組織、體液需要消化的類型，在裂解液中加入10-50mg/ml的蛋白酶K，用于消化；需要提取RNA時，在裂解液和洗液I中加入30％-50％的異丙醇，幫助沉淀RNA。