[發明專利]羅非魚pgr/mstn基因純合敲除雌性完全不育品系及構建方法

在審

• 申請號: 201810169114.7
• 申請日: 2018-02-28
• 公開（公告）號: CN108624619A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 周林燕;方雪蓮;羅鳳;楊蘭英;王德壽
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

本發明屬于水產養殖及現代農業技術領域，一種羅非魚pgr/mstn基因純合敲除雌性完全不育品系及構建方法，證明了羅非魚pgr基因純合敲除導致雌性完全不育、雄性可育的特征，以及利用此特點構建pgr^?/?/mstn^?/?雙基因敲除不育品系，構建養殖新品系的可行性。本發明成功建立并鑒定羅非魚pgr基因純合敲除雌性完全不育品系，pgr基因純合敲除雄魚可育品系，pgr基因純合敲除雄性可以用于生產雙基因敲除群體，篩選得到不育雌性后代，不育是穩定可靠的。同時，mstn^?/?基因敲除個體的生長速度明顯優于正常個體，敲除的雌性個體不能產生后代，不會對野生遺傳資源造成基因組污染。

技術領域

本發明屬于水產及現代農業技術領域，尤其涉及鑒定了一種羅非魚pgr基因純合敲除雌性完全不育品系，以及利用其構建pgr^-/-/mstn^-/-雙基因敲除羅非魚養殖新品系的方法。

背景技術

目前，業內常用的現有技術是這樣的：羅非魚是聯合國糧農組織向世界推薦的優良養殖品系之一，我國羅非魚產業發展迅猛，成為羅非魚第一生產大國和出口國。盡管魚類(包括羅非魚)的新品種繁育有了迅猛發展，但凡涉及到基因操作的新品種繁育，都可能會造成對自然生態系統的潛在生態風險。長期以來，子代完全不育技術是基因操作新品系推廣過程的瓶頸問題。而目前產生不育個體的主要方法是通過基因敲降，或者白硝胺處理抑制原始生殖細胞增殖，或者生產三倍體的方法獲得不育個體，但這種不育的比率較低，且存在安全隱患，目前亟待通過新途徑和新手段獲得完全不育品系。

綜上所述，現有技術存在的問題是：目前產生不育個體的主要方法是通過基因敲降，或者白硝胺處理抑制原始生殖細胞增殖，或者生產三倍體的方法獲得不育個體，但這種不育的比率較低，存在安全隱患，亟待通過新途徑和手段獲得完全不育品系。

解決上述技術問題的難度和意義：完全不育是基因操作(基因敲除和轉基因)新品系推廣的前提和保障，但長期以來，研究者不斷嘗試通過早期生殖細胞特異基因敲除或者敲降，獲得不育品系，但這種不育會完全殺死生殖細胞，雌雄均不育，所以是不能用于不同品系的雜交和傳代的。而三倍體的構建過程繁瑣，需要耗費大量的人力物力，同時最新研究表明，三倍體的不育是相對的，而不是絕對的，用于新品系的構建存在一定的風險。因此，發現的pgr基因敲除雌性群體是一種穩定可靠的不育品系，只需要通過pgr敲除的可育雄性與其它基因操作新品系雜交，獲得的雌性個體就是具有優良養殖性狀的不育群體。該技術方法能夠節約成本，具有很強的可操作性和重復性。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種羅非魚pgr/mstn基因純合敲除雌性完全不育品系及構建方法，可靠且穩定的羅非魚pgr基因純合敲除雌性完全不育品系，以及pgr^-/-/mstn^-/-雙基因編輯新品系的構建方法。

本發明是這樣實現的：利用羅非魚pgr基因純合敲除可育雄性個體，與mstn基因敲除雌性個體雜交，篩選得到pgr^-/-/mstn^-/-雙基因敲除的新品系，而雌性群體既具有生長快速的優良性狀，又具有不育的特征，將用于水產養殖推廣試驗。

所述羅非魚pgr/mstn基因純合敲除雌性完全不育品系及構建方法的構建方法的羅非魚pgr基因純合敲除雌性具有完全不育，構建雙基因敲除新品系的雌性不育群體作為養殖業推廣對象；通過羅非魚pgr基因純合敲除品系和mstn純合敲除品系構建雙基因敲除品系。