[發明專利]經改進的用于陰離子化合物的液相色譜法

有效

• 申請號: 201810162590.6
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN109425673B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: 喬迪·J·荷斯奧;洪峰·尹;奧斯卡·G·波特
• 申請（專利權）人: 安捷倫科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 肖善強

本公開總體上涉及經改進的用于陰離子化合物的液相色譜法，其特別可與質譜聯用。所述方法包括向攜帶樣品的流動相中加入添加劑。流動相添加劑可有效改善所獲得數據中靶標分析物的峰形，并/或消除或至少減少離子抑制。所述方法特別適合陰離子化合物，例如磷酸化化合物。

技術領域

本公開總體上涉及經改進的液相色譜法。具體而言，本公開涉及經改進的總體上使用液相色譜-質譜(LC-MS)系統用于分離和分析化合物的方法。所述方法特別適合陰離子化合物，例如磷酸化化合物。

背景技術

在液相色譜(LC)系統中，由一種或多種溶劑組成的流動相在高系統壓力下被驅動通過分離單元，分離單元通常以色譜柱的形式提供。在高效LC(HPLC)系統和超高效LC(UHPLC)系統中，系統壓力可高達例如約1200bar。所述柱含有固定相，其在LC中通常以顆粒(例如二氧化硅珠)的填充床的形式提供。顆粒被配制和/或官能化以分離樣品中不同的分析物或組分(例如化學化合物)。當樣品流經柱時，樣品接觸固定相。樣品的不同組分對固定相具有不同的親和力。這導致不同的組分在液體流經柱時彼此分離。結果，不同的組分在不同時間從柱出口洗脫。因此，來自柱的液體輸出包含一系列帶，每條帶由樣品的不同組分組成。也就是說，這些帶分別由樣品的不同組分組成，所述組分是通過柱彼此分離的。

流動相和其中攜帶的一系列帶從柱出口流到檢測器，所述檢測器被配置為檢測每條單獨的帶。作為一個例子，檢測器可以包括液體流經的流動池、光源和光檢測器，所述光檢測器被配置為對流經流動池的液體進行基于光學的測量(例如吸光度)。然后，可以利用檢測器產生的電信號來產生色譜圖。通常，色譜圖將信號強度標繪為保留時間的函數，或者標繪為保留體積的函數。數據曲線顯示為與檢測器所檢測到的一系列單獨的帶相對應的一系列峰值。在分析色譜中，色譜圖用于鑒定樣品中的組分，并指示它們在樣品中的相對濃度。或者，在制備色譜中，可利用柱的分離能力來純化樣品，例如從樣品中所含的其他化合物中離析靶標化合物。

LC系統可以與質譜(MS)系統聯用，從而形成混合型LC-MS系統。質譜(MS)系統通常包含用于離子化所研究樣品的組分的離子源、基于氣相離子不同的質荷比(或m/z比，或更簡單的“質量”)分離氣相離子的質量分析儀、用于對分離的離子進行計數的離子檢測器、以及用于根據需要處理來自離子檢測器的輸出信號以產生用戶可解釋的質譜的電子器件。通常，質譜是指示檢測到的離子的相對豐度(例如，離子信號強度，例如對于每個檢測到離子的離子計數數)作為其m/z比的函數的一系列峰。在混合型LC-MS系統中，從LC柱洗脫的經分離的化合物被引入MS系統的離子源中。化合物在離子源中被離子化，所得到的離子被轉移到質量分析儀中，并在分辨質量的基礎上進行檢測。因此，混合型LC-MS系統能夠從樣品獲得三維(3D)LC-MS數據，其特征在于：洗脫時間(或采集時間或保留時間)、離子豐度和通過MS分選的m/z比。

歷史上，利用有機溶劑和極性固定相(例如二氧化硅或氧化鋁)進行LC。利用這種“正相色譜”，更多極性分析物結合到極性固定相上。這些分析物被柱保留，稍后洗脫。非極性分析物結合較弱，因此較早從柱中洗脫。從二十世紀八十年代開始，反相色譜(RPC)被廣泛使用。在RPC中，使用水性溶劑或極性溶劑，并用疏水基團例如十八烷基鏈(C-18)官能化二氧化硅。在RPC中，洗脫順序是相反的或顛倒的。非極性分析物將被非極性固定相保留較長時間，稍后洗脫。相反，極性較大的分析物不與官能化的二氧化硅結合，因此在極性流動相中較早洗脫。