[發明專利]豬白細胞介素4/6與融合豬抗菌肽共表達重組酵母菌制劑的制備及應用

有效

• 申請號: 201810160812.0
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN108558998B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 高榮;萬小平;魏泓;肖永樂;吳雪穎;胡立博;朱玉華;劉建華;田玉虎;呂學斌;王澤洲;李江淩
• 申請（專利權）人: 深圳市前海金卓生物技術有限公司;四川大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K48/00;A61K38/20;A61K38/17;A61P37/04;A61P31/04;A61P31/14;A61P31/20
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

本發明公開了豬白細胞介素4/6與融合豬抗菌肽共表達重組酵母菌制劑的制備及應用。本發明所提供的抗菌肽融合細胞因子FPAPIL46為如下A1)、A2)或A3)：A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白質；A2)將序列表中序列1所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質。實驗證明，本發明的FPAPIL46可以促進淋巴細胞、紅細胞和白細胞的增殖，抑制致病微生物的生長，促進非特異性抗體(IgG、IgG1、IgG2a)及疾病特異抗體的分泌，提高動物的免疫能力與存活率。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種豬白細胞介素4/6與融合豬抗菌肽共表達重組酵母菌制劑的制備及應用。

背景技術

目前中國畜禽養殖業隨著集約化程度提高，畜禽養殖規模和養殖密度日益擴大，迫于控制30多種傳染性病原感染傳播擴散的壓力，尤其是禽流感和呼吸繁殖綜合癥等烈性病相繼循環爆發，動物養殖中耐藥菌引起的腹瀉，沙門、大腸桿菌、鏈球菌、藍耳病(PRRSV)、圓環病毒(PCV2)、豬瘟(CSFV)等各種細菌、病毒性疾病，長期以來是畜牧養殖中瓶頸限制問題，嚴重阻礙畜牧業的發展；使抗生素等藥物添加劑在飼料的濫用情況非常嚴重，畜禽疾病和抗生素飼料添加劑的公害問題已經成為制約我國畜禽養殖業發展水平和經濟效益提高的瓶頸。飼料抗生素添加劑的濫用不僅提高飼養成本，也導致病原微生物的耐藥性和致病力明顯增強，嚴重破壞了動物消化道的微生態平衡，長期使用后在動物體內殘留、并富集，畜禽機體因藥物毒副作用而削弱健康水平，免疫抗病力顯著下降。如此惡性循環，畜禽各種烈性傳染疾病頻繁發生，難于控制和治療。而另一方面，藥物殘留及日益嚴重的畜禽產品食品安全問題，不僅直接威脅著人類自身的健康，也阻礙了養殖業的發展。

動物飼料添加抗生素，長期或不適當使用不僅將誘導病菌出現抗藥性，而且在動物產品出現藥物殘留，造成嚴重的食品安全隱患，損害人類健康以及招致治療抗生素的藥物失效。歐盟、美國等發達地區2006年開始全面限制抗生素作為飼料添加劑。我國也嚴格限制飼料添加抗生素。現代養殖業急需開發取代傳統抗生素的無殘留、無抗性誘導、安全無污染的新型生物飼料及其添加劑。

IL4作為調節動物體液免疫的細胞因子，可激活靜止的B細胞進入增殖階段，并誘導分化和產生高水平IgG1和IgE；具有很強的巨噬細胞激活活性，增強其MHC—II分子表達、抗原呈遞和吞噬能力；能刺激骨髓造血干細胞的增生，增強機體的造血機能；對T細胞也有較廣泛的激活效應，能促進CD4和CD3T細胞的生長，促使活化的T細胞繼續生長；并刺激胸腺細胞增生成熟。

IL6是功能最為廣泛的細胞因子之一，由T細胞和巨噬細胞分泌，刺激免疫反應，促進多種細胞的增殖和分化。例如在炎癥中，IL-6起著抵抗感染的作用。在局部感染的地方，內皮細胞，成纖維細胞，單核巨噬細胞分泌IL6以抗病毒，促進局部激活的T細胞增殖生長，從而誘導T細胞分化成熟為細胞毒性T細胞；當IL6釋放，進入血液循環后，能使激活靜止的造血干細胞，促進血細胞的分裂增殖，誘導或促進其他免疫細胞產生細胞因子并發揮作用；誘導體溫的升高，喚醒機體對抗感染的一系列防御性生理應答。

抗菌肽分子量小，分離純化和檢驗存在一定的困難。目前科研中抗菌肽的主要來源是化學合成，但化學合成成本高，量小，不利于大規模應用。所以，利用基因工程手段，重組連接多個抗菌肽基因，獲得具有廣譜抗多種微生物(G+、G-、病毒、真菌、寄生蟲)和免疫調節活性的高效重組抗菌肽分子。

目前少見有關豬白細胞介素融合抗菌肽基因重組克隆和共表達的報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何提高動物的免疫能力。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種蛋白質，包括豬抗菌肽和白細胞介素4/6。

上述蛋白質為如下a)-e)中任一種蛋白質：