[發明專利]一種經血干細胞膜片的制備方法

在審

• 申請號: 201810158574.X
• 申請日: 2018-02-26
• 公開（公告）號: CN108261566A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 郭靜;聶蘇秦;魏振海;何婷婷
• 申請（專利權）人: 陜西九州生物醫藥科技集團有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/38;A61L27/58;C12N5/071
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 吳甘棠

一種經血干細胞膜片的制備方法，包括以下步驟：一、培養基配制備：1.基礎培養基；2.添加組分；3.血清；4.胰蛋白酶配制；5.經血保存液的配制。二、經血干細胞膜片制備：1.人經血干細胞原代培養；2.人宮血干細胞傳代培養；3.經血干細胞膜片制備；4.經血干細胞膜片內細胞活性鑒定。

技術領域

本發明涉及一種干細胞膜片的制備方法，具體涉及一種經血干細胞膜片的制備方法，屬于生物技術領域。

背景技術

細胞膜片技術是上世紀90年代發展起來的一種組織工程技術，該技術無須支架材料和酶消化，通過刺激細胞外基質分泌，能完整的保留細胞外基質和細胞間連接，形成一種由細胞和細胞外基質組成的致密膜片狀組織。細胞膜片厚度與機械強度除了與培養基條件有關，還與細胞類型密切相關，干細胞活性和增殖能力明顯增強。經血干細胞是一類具有自我更新、多向分化潛能的間充質干細胞，具有增殖能力強、來源廣泛且取材方便無創、培養簡單的特點。

子宮內膜嚴重損傷時內膜功能性修復障礙，代之以結締組織增生修復，子宮前后壁發生纖維化，瘢痕形成，臨床上主要表現為宮腔粘連、閉經及子宮性不孕等，目前尚無有效治療方法。臨床上通用方法是宮腔鏡手術機械性分離宮腔粘連，術后放置宮內節育器或防粘連材料(主要是透明質酸、Intercoat gel)等，并于術后給予雌激素促進內膜生長。但對子宮內膜嚴重損傷，無法解決內膜疤痕問題，不能實現內膜功能性修復，且極易發再次粘連。在專利《膠原支架復合骨髓間充質干細胞制備方法及應用》中使用的是膠原支架復合BMSCs，用于治療嚴重子宮內膜損傷。該復合材料利用了外源性膠原，而且骨髓間充質干細胞的獲取會對患者造成一定的損傷。

經血干細胞是來源于女性經血中的干細胞，具有活性高、分泌因子能力強等特點。經血干細胞膜片利用自身經血干細胞分泌的細胞外基質，完整的保留細胞外基質和細胞間連接，生物相容性好，而且干細胞活性和增殖能力增強，經血干細胞作為治療嚴重子宮內膜損傷的活性成分，具有獲取方便的優點，其可以補充局部干細胞數量，并分泌生長因子改善局部微環境及免疫調節等作用。經血干細胞分泌因子能力更強，而且分泌的因子更符合子宮內膜修復的需要。經血干細胞自身分泌的細胞外基質支架具有良好的生物相容性、可降解性及安全性。為經血干細胞提供支持位點，提高局部經血干細胞濃度，延長經血干細胞作用時間。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種經血干細胞膜片的制備方法，以克服現有技術所存在的上述缺點和不足。

本發明所需要解決的技術問題，可以通過以下技術方案來實現：

一種經血干細胞膜片的制備方法，其特征在于，包括：

一、培養基配制備：

1.基礎培養基；

2.添加組分；

3.血清；

4.胰蛋白酶配制；

5.經血保存液的配制；

二、經血干細胞膜片制備：

1.人經血干細胞原代培養；

2.人宮血干細胞傳代培養；

3.經血干細胞膜片制備；

4.經血干細胞膜片內細胞活性鑒定。

其中，所述基礎培養基，制備基礎培養基；

基礎培養基：H-DMEM或者DF12；

形式：干粉、液體；

提供狀態：無菌；