[發明專利]一種銀香菊組織培養快繁體系建立的方法

在審

• 申請號: 201810156210.8
• 申請日: 2018-02-24
• 公開（公告）號: CN108207634A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 付玉杰;牛麗麗;焦驕;蓋慶巖;秦啟萍;王微;王慧梅
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種銀香菊莖段組織培養快繁體系建立的方法，屬于生物技術領域植物組織培養范疇。包括以下幾個步驟：(1)外植體的選取與滅菌；(2)愈傷組織的誘導；(3)叢生芽的分化與增殖；(4)生根培養；(5)銀香菊再生植株煉苗與移栽。本方法采用銀香菊莖段為外植體，通過調節MS培養基中特定激素的種類與濃度，成功建立了銀香菊組織培養快繁體系。該方法獲得外植體容易，組培操作簡單，具有培養周期短，繁殖系數高等特點，為進一步實現工業化生產奠定基礎。

技術領域

本發明涉及一種銀香菊組織培養快速繁育方法，屬于植物組織培養技術領域。

背景技術

植物組織培養技術，又稱為離體培養，是指在無菌環境下利用人工培養條件，對植物器官、細胞、原生質體等組織進行培養，并使之生長、發育再生出完整植株的過程。其原理是根據植物細胞的全能性，既植物細胞具有該植物體全部遺傳的可能性，在一定條件下具有發育成完整植物體的潛在能力。植物組織培養具有生長周期短，繁殖率高，培養條件可以人為控制，管理方便等優點。由于其生產方法的獨特，使組織培養技術對植物資源的保質、保純和反季節生產有著特殊作用，同時，采用組織培養技術可以直接誘變和篩選出具有抗病、抗炎等優良性狀的品種，因而為植物資源的工廠化生產奠定基礎。

銀香菊[Santolina chamaecyparissus]，別名為銀灰菊，俗稱圣麻菊、香綿菊、棉杉菊。菊科，神圣亞麻屬植物，銀灰菊原產于地中海地區，在原產地國家有較多的野生種及自然群落分布，一些銀灰菊品種在印度等南亞國家廣有栽培(高橋章，1998)，我國長江以南的部分地區也有栽植。銀香菊為常綠多年生草本，株高50厘米，枝葉密集，新梢柔軟，具灰白柔毛，葉銀灰色花黃色。喜光，耐熱，忌土壤濕澇。在遮蔭和潮濕環境葉片淡綠色。花朵黃色，如紐扣，花期6-7月。由于銀香菊植株具有刺激性香味，因此常被作為具有驅蚊功效的傳統芳香植物來種植，歐洲一些國家很早就有用銀香菊做香囊防蚊蟲叮咬的習慣，也有在住宅或者牲畜棚周圍種植銀香菊以驅蚊的記載(劉禺卿，2008)。

目前銀香菊在中國主要作為園林地被植物或盆栽芳香花草來種植，其繁殖方法主要以種子繁殖、扦插繁殖為主，因其繁殖方法受到季節限制，且扦插繁殖需要大量的母本，難以滿足日益增長的市場需求，因此，植物組織培養技術作為一種快速繁殖的培養方式不僅可以克服自然氣候的影響，而且能夠為植物育種研究提供材料和技術支持而受到越來越多的關注。

發明內容

本發明的目的在于提供一種銀香菊的組培快繁方法。本發明以銀香菊的莖段為外植體，通過不定芽和愈傷組織的誘導培養、分化培養、增殖培養、生根培養、煉苗移栽等過程獲得了銀香菊的離體再生植株，建立了有效的銀香菊組培快繁技術體系，具有較高的應用價值。

為達到上述目的，本發明包括以下的步驟：

(1)外植體的消毒：選擇生長狀況較好的幼嫩枝條為外植體，置于自來水下流動沖洗30min，自然風干后放在超凈臺中，首先用75％乙醇浸洗30s，無菌水漂洗4次，再用0.1％HgCl₂溶液浸洗8min，無菌水漂洗4次。將枝條修剪成1cm左右的莖段接種于誘導培養基中，培養溫度為25℃，每天光照16h，光照強度1800Lx，培養10天后統計污染率；

(2)愈傷組織誘導：將無菌外植體接種至愈傷組織誘導培養基中進行誘導培養，培養溫度為25℃，每天光照16h，光照強度1800Lx，培養30天后統計愈傷組織誘導率；

(3)分化誘導與增殖培養：將步驟(2)中誘導出的愈傷組織接種到分化培養基中進行分化培養，接種后在溫度為25℃，每天光照16h，光照強度1800Lx條件下，培養40天后統計愈傷組織生長情況；當分化出的芽長至1-2cm高時，將其分成單株后轉入增殖培養基中進行增殖培養，培養條件不變，30天后統計增殖情況；

(4)生根培養：待步驟(3)增殖培養獲得的叢生芽長至4cm高時，將其轉移至生根培養基中進行生根培養，培養條件為每天光照16h，光照強度1800Lx，培養溫度為25℃，30后統計生根率；