[發(fā)明專利]一種分離胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞的方法及其用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810155980.0
• 申請(qǐng)日: 2018-02-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108410799A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋清;馬麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 宋清;馬麗
• 主分類號(hào): C12N5/073
• 分類號(hào): C12N5/073;C12Q1/6883;G01N33/68
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

本發(fā)明公開(kāi)一種分離胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞的方法，所述方法結(jié)合胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞體積巨大的特性，利用單次或多次過(guò)濾的方法來(lái)去除體積偏小的非滋養(yǎng)細(xì)胞，從而得到純的滋養(yǎng)細(xì)胞。另外，本發(fā)明公開(kāi)一種上述所述的胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞在制備產(chǎn)前診斷藥物或試劑盒中的用途，分離得到單個(gè)或多個(gè)胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞后，進(jìn)行細(xì)胞裂解，可以直接得到滋養(yǎng)細(xì)胞的DNA、RNA、蛋白、small RNA、甲基化的DNA和RNA、線粒體的DNA等，從而獲得胎兒的信息。本發(fā)明分離胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞的方法及在產(chǎn)前診斷中的用途，比以往胎兒全基因組獲取方法更為簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、操作方便，具有廣泛的經(jīng)濟(jì)實(shí)用性和臨床推廣價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種無(wú)創(chuàng)性獲取胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞并檢測(cè)胎兒細(xì)胞的DNA信息用于產(chǎn)前診斷的方法，屬于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

遺傳突變是指7000余種已知罕見(jiàn)致病遺傳突變甚至包括未知突變和常見(jiàn)病的致病突變，而現(xiàn)有技術(shù)僅對(duì)21號(hào)染色體三體綜合征(即唐氏綜合征)，愛(ài)德華綜合征(T18)、帕陶氏綜合征(T13)染色體疾病的產(chǎn)前診斷。而胎兒除了染色體數(shù)目的異常，還有其它大量的如遺傳性單基因疾病和多基因疾病。

目前市場(chǎng)上對(duì)胎兒進(jìn)行遺傳信息檢測(cè)的技術(shù)方案中其中一種是無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷，參考文獻(xiàn)：【Chiu RW,Chan KC,Gao Y,Lau VY,Zheng W,Leung TY,Foo CH,Xie B,Tsui NB,Lun FM,Zee BC,Lau TK,Cantor CR,Lo YM.Noninvasive prenatal diagnosis of fetalchromosomal aneuploidy by massively parallel genomic sequencing of DNA inmaternal plasma.Proc Natl Acad Sci U S A.2008 Dec 23；105(51):20458-63】、【Noninvasive diagnosis of fetal aneuploidy by shotgun sequencing DNA frommaternal blood.Fan HC,Blumenfeld YJ,Chitkara U,Hudgins L,Quake SR.Proc NatlAcad Sci U S A.2008 Oct 21；105(42):16266-71】。此技術(shù)利用孕婦外周血里的胎兒游離DNA來(lái)檢測(cè)染色體數(shù)目異常，該方法取代了傳統(tǒng)的羊膜腔穿刺取羊水或絨毛膜細(xì)胞培養(yǎng)后進(jìn)行染色體分析，其特點(diǎn)是無(wú)創(chuàng)，對(duì)胎兒無(wú)任何風(fēng)險(xiǎn)，準(zhǔn)確。

但是此方法有局限性：第一，此法所能檢測(cè)的遺傳疾的數(shù)目是非常有限，僅有三種；不能檢測(cè)的遺傳基因疾病，比如單基因疾病和多基因疾病的異常，以及一些胎兒基因組中的微細(xì)變化，尤其是一些導(dǎo)致嚴(yán)重疾病或發(fā)育障礙的基因異常；第二，做出診斷的時(shí)間點(diǎn)較晚，已到中期引產(chǎn)期，一旦診斷出胎兒有遺傳缺陷，則做的引產(chǎn)手術(shù)對(duì)母親的健康影響較大。

孕婦外周血中存在少量的胎兒細(xì)胞，參考文獻(xiàn)：【W(wǎng)alknowska J,Conte FA,Grumbach MM.1969.Practical and theoretical implications of fetal-maternallymphocyte transfer.Lancet 1:1119–1122.】，孕婦外周血中有許多種胎兒細(xì)胞，如胎兒紅細(xì)胞，胎兒淋巴細(xì)胞，胎兒白細(xì)胞，以及胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞。這些胎兒細(xì)胞可透過(guò)胎盤屏障進(jìn)入母親體內(nèi)，進(jìn)入母親的血液循環(huán)。在這些胎兒細(xì)胞中，有兩種細(xì)胞較易分離。一種是胎兒的紅細(xì)胞，因?yàn)槟赣H的紅細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞核，是飛盤形狀；而胎兒的紅細(xì)胞有細(xì)胞核，是球型的；兩種紅細(xì)胞的明顯的區(qū)別，使得我們很容易利用一些特殊性狀分開(kāi)這兩種細(xì)胞。另一種較易分離的細(xì)胞，是胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞。這種細(xì)胞的體積巨大(直徑30-80微米)，母親血液中完全沒(méi)有其他相似體積的細(xì)胞類型(其他細(xì)胞類型的直徑均為18微米以下)，這種超大的體積，使得胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞比胎兒紅細(xì)胞更容易分離，因?yàn)榫o靠大小就可做到分離，所以可以做到準(zhǔn)確，快速，簡(jiǎn)單，便宜。