[發明專利]一種溶葡萄球菌酶局部緩釋制劑及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200810043584.5
• 申請日: 2008-06-30
• 公開（公告）號: CN101618210A
• 公開（公告）日: 2010-01-06
• 發明（設計）人: 黃青山;李莉
• 申請（專利權）人: 上海高科聯合生物技術研發有限公司
• 主分類號: A61K38/48
• 分類號: A61K38/48;A61K47/34;A61K9/16;A61P31/04
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技術領域

本發明涉及一種生物抗菌緩釋制劑，具體的說涉及一種溶葡萄球菌酶緩釋制劑。

背景技術

溶葡球菌酶(Lysostaphin)是一種肽鏈內切酶。該酶可切斷細菌細胞壁肽聚糖中的五甘氨酸肽鍵橋結構，從而達到迅速溶解并殺死細菌的目的。體外藥效學研究表明，溶葡球菌酶對多種金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌具有良好的抑殺效果，對化膿性棒狀桿菌、鏈球菌和巴氏桿菌具有較好的抑殺效果。特別是對耐藥性金黃色葡萄球菌，MRSA及具有多藥抗性的“超級細菌”，溶葡萄球菌酶也同樣有很強的殺菌作用，由于其能溶解出于包括生長靜止期的細菌，故不容易誘導產生耐藥菌株。

已有文獻報道體內注射溶葡球菌酶用以治療金黃色葡萄球菌引起的主動脈心內膜炎及奶牛乳腺炎，可達到清除致病菌的目的。然而，藥物動力學研究表明，溶葡球菌酶通過靜脈注射后在動物體內分布迅速，代謝速度快，其在血相中的消除半衰期為29分鐘。如此短的半衰期意味著需要進行大劑量給藥或重復多次給藥，對其在臨床上的應用不利。

利用生物可降解聚合物，包裹多肽、蛋白質藥物制成緩釋微球，可調節藥物的釋放速率，延長給藥時間，保護蛋白活性，對生物藥物的臨床應用具有重要意義。根據不同的臨床治療需要，這些微?？捎糜诟鞣N口服、注射、埋植等各種給藥途徑。

傳統的藥物制備工藝，如相分離法、噴霧干燥法等，容易使蛋白質變性、失活，很難滿足生物大分子的藥物傳遞。通過超臨界流體微粒制備蛋白及多肽緩釋微球具有其它方法無法比擬的優點。

對于極性物質來說，由于它們在CO₂中相對溶解度低，通常需要將其溶解于常規使用的溶劑中。Yeo等描述了超臨界反溶劑(Supercriticle?Anti-Solvent，SAS)過程作為制備微球的技術(Yeo等Macromolecules，1993，26，p6207)。在SAS方法中，CO₂流體和溶解含極性溶質的液體溶劑被分別泵入霧化罐中，通過噴嘴后形成細小液滴。在霧化罐中，CO₂作為溶質的逆溶劑，溶質的固體微粒形成并被回收到提籃式設計的過濾器中。

在多肽類藥物的微粒制備過程中，這些溶劑的選擇需要具有以下一些特性：

(1)能與超臨界CO₂流體完全互溶；(2)不影響多肽的立體結構和活性。美國專利US?6,063,910描述了應用超臨界流體技術制備蛋白微粒的過程。在該過程中，蛋白質作為溶質被溶解于90％乙醇溶液后，被泵入超臨界CO₂流體霧化罐中，形成平均粒徑小于5μm的蛋白質微球。

Caliceti等描述了一種通過超臨界反溶劑方法制胰島素-聚乳酸微球的制備方法(Journal?of?Controlled?Release，94(2004)p195)。首先將胰島素、聚乙二醇1000、聚乳酸分別溶解于二甲亞砜(DMSO)、二氯甲烷溶液中，再將兩種溶液等體積混合后被泵入霧化罐，通過SAS法形成胰島素-聚乙二醇-PLA緩釋微球。其中胰島素的釋放速率主要由水溶性聚乙二醇含量所控制。

發明內容

本發明需要解決的技術問題是公開一種具有較長殺菌活性時間的緩釋制劑。

本發明需要解決的技術問題之二是提供該緩釋制劑的制備方法。

本發明需要解決的另一個技術問題是公開該緩釋制劑的應用。

本發明的構思是這樣的：

溶葡萄球菌酶(lysostaphin)是一種含鋅的金屬蛋白酶，它能專一降解革蘭氏陽性菌(如金黃色葡萄球菌)細胞壁肽聚糖層的甘氨酸肽鍵，從而裂解金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌的細胞壁，起到徹底殺死細菌的目的，尤其對耐藥性金黃色葡萄球菌等難以根除的致病菌的效果非常好。

聚乳酸類(PLA，PLGA)可生物降解材料是基礎的生物醫學材料，可作為藥物控制釋放的載體材料，該類物質降解產物為乳酸和水分子，生物相容性好。

本發明以溶葡萄球菌酶為殺菌活性成分，通過超臨界流體微粒制備技術制得含溶葡萄球菌酶的聚乳酸-羥基乙酸(PLA-PLGA)多聚物微球。

本發明的技術方案如下：

所述及的溶葡萄球菌酶緩釋制劑包括溶葡萄球菌酶1-10wt％，甘露醇1-10wt％，聚乳酸(PLA)0-90wt％，聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)5-95wt％。

其中所述及的溶葡萄球菌酶可采用上海高科聯合生物技術研發有限公司市售的產品。

所述及的甘露醇為市售注射用甘露醇。