[發明專利]用于生成單克隆抗體的方法和試劑

在審

• 申請號: 201810154961.6
• 申請日: 2012-03-09
• 公開（公告）號: CN108220297A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: R.波拉基維奇;W.C.鐘;J.E.拉什;S.A.博索萊爾
• 申請（專利權）人: 細胞信號科技公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;G01N27/62
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 黃希貴

1.用于獲得特異性結合抗原的免疫球蛋白的重鏈或輕鏈的核苷酸序列或氨基酸序列的方法，其包括：

(a) 提供編碼至少一種動物的免疫球蛋白鏈或其可變區的核酸序列；

(b) 獲得特異性結合抗原的多克隆免疫球蛋白群體，并且獲得所述群體的重鏈或輕鏈或其可變區的肽片段的質譜信息；

(c) 將所述肽片段的質譜信息與從所述核酸序列預測的質譜信息相關聯，以鑒定包含所述肽片段的免疫球蛋白鏈(或其可變區)的核苷酸序列或氨基酸序列，其中所述預測質譜信息源自所述核酸序列編碼的預測氨基酸序列；和

(d) 基于所述肽片段對所述免疫球蛋白鏈或其片段的氨基酸序列覆蓋率從鑒定的免疫球蛋白鏈(或其可變區)的核苷酸序列或氨基酸序列中選擇，以獲得特異性結合抗原的免疫球蛋白的重鏈或輕鏈的核苷酸序列或氨基酸序列。

2.權利要求1的方法，其中所述步驟(a)的至少一種動物是暴露于所述抗原的動物。

3.權利要求1的方法，其中所述核酸序列是表達的核酸序列。

4.權利要求1的方法，其中所述編碼免疫球蛋白鏈(或其可變區)的核酸序列通過以下從所述至少一種動物獲得：

(1) 從來自所述至少一種動物的白血細胞分離核酸分子；和

(2) 使用對于在編碼所述免疫球蛋白鏈(或其可變區)的核酸分子鄰近的多核苷酸序列特異性的引物擴增編碼所述免疫球蛋白鏈(或其可變區)的核酸分子；和

(3) 獲得編碼免疫球蛋白鏈(或其可變區)的所述擴增的核酸分子的核苷酸序列。

5.權利要求4的方法，其中編碼多肽的核酸分子是RNA分子，并且所述擴增步驟包括初始的逆轉錄步驟。

6.權利要求4的方法，其中所述與編碼所述免疫球蛋白鏈(或其可變區)的核酸分子鄰近的多核苷酸序列選自免疫球蛋白基因側翼的基因組DNA、編碼免疫球蛋白鏈恒定區的多核苷酸序列、和編碼免疫球蛋白鏈構架區的多核苷酸序列。

7.權利要求1的方法，其中所述預測的質譜信息使用包括以下步驟的方法來獲得：

(i) 用一種或多種蛋白酶和/或一種或多種化學蛋白切割試劑進行所述核酸序列的核苷酸序列編碼的預測氨基酸序列的理論消化來生成虛擬的肽片段；和

(ii) 生成所述虛擬肽片段的預測質譜。

8.權利要求1的方法，其中所述步驟(a)的核酸序列、預測的氨基酸序列和源自所述核酸序列的預測質譜位于遺傳物質數據庫中。

9.權利要求1的方法，其中所述步驟(b)的所述多克隆免疫球蛋白群體從動物的體液樣品或其部分獲得。

10.權利要求9的方法，其中所述體液選自血液、腦脊液、滑液、腹膜液、粘膜分泌物、淚液、鼻分泌物、唾液、乳和泌尿生殖道分泌物。