[發明專利]用于肝癌切除術后預后的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810153396.1
• 申請日: 2018-02-22
• 公開（公告）號: CN108398556A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 鄭利民;陳敏山;許靜;劉超群;張耀軍;石明
• 申請（專利權）人: 中山大學腫瘤防治中心
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/533
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 劉孟斌

本發明涉及一種用于肝癌切除術后預后的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒。本發明所述的用于肝癌切除術后預后的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒包括第一抗體和第二抗體，所述第一抗體是選自對于以下蛋白分子標記物的抗體組合：CD68(細胞分化抗原68)，PD?L1(程序性死亡配體1)。本發明所述的試劑盒采用雙抗體結合指標，可以更加精確地反映組織中PD?L1的表達模式，從而更好地評估患者的預后，幫助醫生選擇合適的治療人群和方式，從而為有效診治提供更加有力的支持。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于肝癌切除術后預后的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒，具體涉及一種用于檢測肝癌組織中PD-L1分子表達模式的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒。

背景技術

原發性肝細胞肝癌(以下簡稱為肝癌)是我國最常見和預后最差的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率均居惡性腫瘤的前列。目前治療肝癌最有效的方法仍是手術切除和肝移植；然而多數患者在確診時已處于中晚期，不具備手術的指征和條件，加上術后的高復發率，導致肝癌的總體五年生存率仍處于較低水平。近年來的大量臨床試驗證明，阻斷PD-L1/PD-1共抑制信號通路的免疫治療方法能延長部分晚期腫瘤(包括肝癌)患者的生存，并顯示出持久的療效。同時，新近的臨床研究還發現，當腫瘤中存在腫瘤細胞表達PD-L1時，患者能夠對治療具有更好的應答。值得注意的是也有臨床研究顯示腫瘤中的免疫細胞PD-L1表達時，患者對治療的響應率更高。然而，目前臨床上對PD-L1表達評估方法采用傳統免疫組化染色，難以區分腫瘤細胞和免疫細胞的表達情況，因此用于療效判斷的能力有限。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測肝癌組織中PD-L1分子表達模式的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒，它采用雙抗體結合指標，可以更加精確地反映組織中PD-L1的表達模式，從而更好地評估患者的預后，幫助醫生選擇合適的治療人群和方式，從而為有效診治提供更加有力的支持。

本發明所述的用于肝癌切除術后預后的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒，包括第一抗體和第二抗體，所述第一抗體包括用于檢測以下兩個蛋白分子標記物的抗體：CD68(細胞分化抗原68)，PD-L1(程序性死亡配體1)；還包括TSA(酪胺信號放大試劑)。

根據本發明所述的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒的進一步特征，所述第二抗體是辣根過氧化物酶標記的第二抗體。

通過本發明所述的用于肝癌切除術后預后的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒，能綜合分析上述兩種第一抗體所特異性標記的抗原在肝癌標本中的表達水平，達到評估組織中PD-L1的表達模式和水平的目的。

本發明所述的用于肝癌切除術后預后的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒的檢測原理是：

首先，利用基于免疫組織化學技術的酪胺信號放大技術檢測PD-L1和CD68兩種分子標記物在肝癌切除術患者石蠟切片腫瘤區域中的表達情況。

然后，利用專業圖像分析軟件分析PD-L1在肝癌癌巢組織中的表達模式：分別采用PD-L1與CD68分子雙陽性信號占CD68分子的單陽性信號的比例大于等于5％為巨噬細胞PD-L1陽性的閾值；PD-L1陽性與CD68陰性占總體PD-L1表達的比例大于等于5％為腫瘤細胞PD-L1陽性的閾值。并以此閾值對樣本進行“陽性”與“陰性”的分組。

最后，在453例接受原發性肝癌切除術患者中，通過生存分析，可獲得腫瘤細胞或者巨噬細胞表達與不表達PD-L1兩組患者的總體生存率都具有顯著差異(P<0.05)。

本發明所述的用于肝癌切除術后預后的雙抗體聯合熒光檢測試劑盒具有以下優點：

(1)試驗方法非常成熟，檢測過程簡便，直觀，易于重復，由普通技術員即可完成。

(2)采用免疫多標技術便于客觀準確地區分表達PD-L1的細胞類型，優于傳統免疫組織化學技術的檢測手段。

附圖說明