[發明專利]基于POCT模式的MTHFR(C677T)基因型快速檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810152206.4
• 申請日: 2018-02-14
• 公開（公告）號: CN109321648A
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 賀庭禎;羅德朋;向霄;熊偉;黎幫勇;鐘越;劉黎;董銳;崔奇新;楊園
• 申請（專利權）人: 重慶京因生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;王璐

1.一種檢測MTHFR(C677T)基因多態性的引物對，其特征在于，檢測MTHFR(C677T)基因的引物對包括：

MTHFR(C677T)上游引物:5’-CATCCCTATTGGCAGGTTAC-3’；

MTHFR(C677T)下游引物:5’-TGTGTCAGCCTCAAAGAAAA-3’。

2.與權利要求1所述引物對配套使用的探針組合，其特征在于，所述探針組合包括：

MTHFR(C677T)野生型探針:5’-FAM-AATCGGCTCCCGCA-MGB-3’；

MTHFR(C677T)突變型探針:5’-Teaxs Red-AAATCGACTCCCGCA-MGB-3’。

3.根據權利要求2所述的探針組合，其特征在于，所述探針組合包括：

MTHFR(C677T)野生型探針:5’-FAM-AATC+GGCTCCCGCA-MGB-3’；

MTHFR(C677T)突變型探針:5’-Teaxs Red-AAATCG+ACTCCCGCA-MGB-3’；

其中，“+”表示右側的單堿基為LNA修飾。

4.含有權利要求1所述引物對和權利要求2或3所述探針組合的檢測試劑或試劑盒。

5.一種檢測MTHFR(C677T)基因多態性的PCR反應液，其特征在于，所述PCR反應液包括權利要求1所述的引物對與權利要求2或3所述的探針組合。

6.根據權利要求5所述的PCR反應液，其特征在于，所述PCR反應液還包括DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液、MgCl₂和細胞裂解液。

7.根據權利要求6所述的PCR反應液，其特征在于，所述PCR反應液中各組分的終濃度為：0.5-1.5×PCR反應緩沖液、DNA聚合酶0.04-0.1U/μL、dNTPs 0.1-0.5mM、上游引物0.2-0.7μM、下游引物0.2-0.7μM、野生型探針0.2-0.7μM、突變型探針0.2-0.7μM、Mg²⁺1-2.5mM和1×細胞裂解液；

所述細胞裂解液由十二烷基硫酸鈉和聚乙二醇辛基苯基醚組成；

其中，十二烷基硫酸鈉的濃度為0.0005-0.015％(w/v)；聚乙二醇辛基苯基醚的濃度為0.001-0.03％(w/v)。

8.根據權利要求7所述的PCR反應液，其特征在于，所述PCR反應體系中各組分的終濃度為：1.1×PCR反應緩沖液、DNA聚合酶0.05U/μL、dNTPs 0.2mM、上游引物0.4-0.6μM、下游引物0.4-0.6μM、野生型探針0.4-0.6μM、突變型探針0.4-0.6μM、Mg²⁺2.5mM和1×細胞裂解液。

9.基于POCT模式的MTHFR(C677T)基因型快速檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權利要求6-7任一所述的PCR反應液。

10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，該試劑盒進行熒光定量PCR時，其工作程序為：95℃預變性5min；95℃變性8s，63℃退火及延伸35s，循環50次。