[發明專利]多次低劑量輻射用lewis荷瘤小鼠模型的建立方法

在審

• 申請號: 201810148741.2
• 申請日: 2018-02-13
• 公開（公告）號: CN108244049A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 高玲;劉青杰;田梅;封江彬;陸雪;蔡恬靜;田雪蕾;李至薈;王春燕;閆娟
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心輻射防護與核安全醫學所（國家衛生計生委核事故醫學應急中心）
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 劉景祥

本發明公開了多次低劑量輻射用lewis荷瘤小鼠模型的建立方法，屬于實驗動物學領域，其主要步驟包括：將常規體外培養的lewis細胞采用皮下接種法注射入小鼠右肩胛上皮下；在室溫環境飼養小鼠，待腫瘤長到2cm×2cm大小，將腫瘤組織剝離，切成均勻小塊，稱取0.05g小塊腫瘤組織，植入小鼠腋下，縫合，在室溫環境飼養，一周后測量腫瘤大小。本發明與常規荷瘤小鼠模型建立方法相比，有確保組內C57小鼠植入的腫瘤大小相等，模型均一的特點，符合低劑量輻射研究需要。

技術領域

本發明屬于實驗動物學領域，具體涉及多次低劑量輻射用lewis荷瘤小鼠模型的建立。

背景技術

低劑量輻射(low dose radiation，LDR)對機體抗腫瘤功能的影響是目前存在爭議的問題。2012年USCARE報告認為長期LDR可使免疫系統遭到破壞，出現炎癥反應。可是實際上除了對胎兒的輻射損傷效應以外，LDR對人體健康效應一直未有定論。但對高本底地區和核工業工人流行病學研究發現二者的惡性腫瘤死亡率低于對照地區和非放射工人。由于低劑量輻射暴露人群分布非常廣泛，因此研究低劑量輻射對機體抗腫瘤免疫功能影響，將有助于保障低劑量輻射暴露人群健康，指導放射防護的實踐。

動物模型可以用來幫助人們認識電離輻射效應，但由于自發性腫瘤潛伏期較長，目前還沒有合適的動物模型來評價LDR對抗腫瘤免疫功能的影響，也沒有受到廣泛認可的相關實驗數據報道。因此，要明確低劑量輻射對機體抗腫瘤功能的影響，需要有一個合適的研究用動物模型。

常規的荷瘤小鼠模型在建立過程中受多種因素的干擾，腫瘤組織生長大小不一，對研究低劑量輻射對機體抗腫瘤功能的影響的實驗結果造成干擾。

發明內容：

為克服上述現有技術存在的荷瘤小鼠模型腫瘤組織生長大小不一、對研究低劑量輻射對機體抗腫瘤功能的影響的實驗結果造成干擾等問題，本發明提供了一種多次低劑量輻射用lewis荷瘤小鼠模型的建立方法。

本發明的目的可以通過采取以下技術方案來實現：

多次低劑量照射用lewis荷瘤小鼠模型的建立方法，包括如下步驟：

(1)取6～8周齡無特異病原微生物(SPF)級C57雄性小鼠6-8只，將常規體外培養的lewis細胞采用皮下接種法注射入小鼠右肩胛上皮下；

(2)在室溫環境飼養步驟(1)中接種lewis細胞的C57小鼠，自由飲水、進食；

(3)待腫瘤長到2cm×2cm大小后,將腫瘤組織剝離，置于滅菌的含磷酸鹽緩沖液(PBS)培養皿中，用手術刀將腫瘤組織切勻小塊；

(4)取6～8周齡無特異病原微生物(SPF)級C57雄性小鼠6-8只，將(3)中得到的小塊腫瘤組織稱取0.05g植入小鼠腋下，縫合，在室溫環境飼養，自由飲水、進食，一周后測量腫瘤大小。

優選的，步驟(1)中所述接種lewis細胞數目為l×l0⁶-l×l0⁷/只小鼠；

優選的，步驟(2)或步驟(4)所述在室溫環境飼養，具體為在晝夜交替、20-23℃條件下飼養。

優選的，步驟(3)測量腫瘤大小的方法為用游標卡尺測量。

優選的，步驟(3)所述將腫瘤組織剝離前，先用10mg/mL的巴比妥按照體重劑量對小鼠進行麻醉。

優選的，所述體重劑量標準為0.05mL/10g。

優選的，步驟(3)所述將腫瘤組織剝離，具體為將小鼠仰臥固定，對小鼠胸壁進行酒精消毒后，用手術前與手術刀剝離腫瘤組織。

有益效果