[發明專利]一種組合標志物及其在制備胃癌發生風險預測試劑盒中的應用及其測定系統和方法

有效

• 申請號: 201810147588.1
• 申請日: 2018-02-12
• 公開（公告）號: CN110157801B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 李梢;譚艾迪
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 北京金恒聯合知識產權代理事務所 11324
• 代理人: 李強

本發明人提出了一種基于組合標志物來進行胃癌患者發生風險評估的方法，依據病例樣本中組合標志物的表達情況，定量衡量胃癌發生風險。本發明涉及九個蛋白LIF、MIF、BCL1L2、CCND2、TBC1D1、FABP1、ACSL5、ACADS構成的組合標志物，供檢測該組合標志物的檢測試劑盒，及胃癌發生風險評估和分層系統，結合上述標志物檢測結果和患者的風險分層結果，發現高風險患者具有“過食肥甘厚味”和“口臭”、“反酸”、“胃灼痛”等胃火(胃熱)癥狀，和/或“胃黏膜紅白相間”、“胃黏膜下血管顯露”等胃鏡下癥狀。56和30例慢性胃炎患者案例的實施結果表明，本發明能預測胃癌發生風險，對胃癌前病變和胃癌進行預警。

技術領域

本發明涉及一種組合標志物在制備用于胃癌發生風險預測試劑盒中的應用，及其測定系統與方法。

背景技術

胃癌是全球最常見的腫瘤之一，在亞洲特別是中國尤為普遍[1]。早期胃癌的預后顯著優于晚期[2]，因此胃癌高風險人群的識別，具有重要的臨床意義。目前，雖然已有研究揭示了一些胃癌的高風險因素，如吸煙、亞硝酸鹽攝入、幽門螺桿菌感染、慢性胃炎等[3-5]，但仍缺乏有效的臨床診療手段，尤其是缺乏有效的胃癌發生風險標志物以指導臨床診療[6]。

作為一個復雜過程，胃癌的發生并非由單個基因或其產物決定，而是多個病理過程系統反應的結果。因此，將多個病理過程中具有代表性的分子組合起來，即組合標志物，可能能夠更好地刻畫癌癥發生過程的復雜性。目前也有文獻報道在一些腫瘤中，組合標志物比單個標志物或臨床病理有更好的預測效果[7-9]，有些多個分子構成的組合標志物甚至已經納入到臨床指南中[10]。胃炎到胃癌的發生存在不同的病理階段(萎縮性胃炎、腸上皮化生和不典型增生)[11]，但目前對于胃炎到胃癌發生的組合標志物還較為缺乏。因此，識別有效的組合標志物對于預測胃癌發生風險具有重要的意義。

發明內容

根據本發明的一個方面，提供了檢測一種組合標志物的表達水平的試劑在制備用于胃癌發生風險判斷的組合物中的應用，其中該組合標志物是九種蛋白分子LIF、MIF、CCND2、BCL1L2、FABP1、ACSL5、ACADS、 TBC1D1、CDX2的相對表達水平的組合，所述組合標志物由如下風險指數表征：

風險指數＝1.3+(-0.0685*LIF)+(0.0372*MIF)+(0.165* BCL2L1)+(0.245*CCND2)+(0.0753*TBC1D1)+(0.110*FABP1)+ (0.176*ACSL5)+(-0.0650*ACADS)+(0.0618*CDX2)，

其中，LIF、MIF、CCND2、BCL1L2、FABP1、ACSL5、ACADS、TBC1D1、CDX2各表示相應蛋白的相對表達水平，相對表達水平的計算公式為：

相對表達水平＝(絕對表達水平–基準組均值)/基準組方差其中，絕對表達水平是從以下值中選出的一種：

-qPCR檢測結果中的相對表達水平的log2值，

-測序檢測出的讀數的log2值，以及

-免疫組化檢測結果的平均光密度值。

根據本發明的另一個方面，提供了一種用于胃癌發生風險判斷的檢測試劑盒，用于獲得七個分子LIF、CCND2、BCL1L2、FABP1、ACSL5、 ACADS、TBC1D1在胃組織和/或血液中的蛋白水平的表達，

其中，MIF和CDX2在血液和/或胃組織中的蛋白水平的表達用零值代替。

根據本發明的一個進一步的方面，上述的胃組織中檢測的免疫組化試劑盒包括：

試劑A：封閉液，為10％山羊血清；

試劑B：已稀釋的即用型抗LIF一抗；

試劑C：已稀釋的即用型抗CCND2一抗；