[發明專利]調控轉基因表達的方法和組合物

在審

• 申請號: 201810145310.0
• 申請日: 2012-09-21
• 公開（公告）號: CN108610423A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: E·J·瑞巴
• 申請（專利權）人: 桑格摩生物科學股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/22;C12N15/62;C12N5/10
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳揚揚

1.一種非天然存在的融合蛋白，其包含與內源白蛋白基因結合的鋅指蛋白或TALEDNA-結合結構域和內切核酸酶裂解結構域，其中所述融合蛋白切割所述內源白蛋白結構域，且其中所述鋅指蛋白包含4、5或6個含識別螺旋區的鋅指結構域，其中所述鋅指蛋白包含在表1、表3、表5或表8的單行中示出的識別螺旋區，并且另外其中TALE DNA-結合結構域結合在表12的單行中示出的序列。

2.一種多核苷酸，其編碼根據權利要求1所述的一種或多種融合蛋白。

3.一種分離的哺乳動物細胞，其包含根據權利要求1所述的一種或多種融合蛋白或根據權利要求2所述的一種或多種多核苷酸。

4.根據權利要求3所述的細胞，其中所述細胞是干細胞。

5.根據權利要求4所述的細胞，其中所述干細胞選自胚胎干細胞(ESC)、誘導多能干細胞(iPSC)、肝干細胞和肝臟干細胞。

6.一種試劑盒，其包含根據權利要求1所述的融合蛋白或根據權利要求3所述的多核苷酸。

7.一種裂解細胞中的內源白蛋白基因的體內或離體方法，所述方法包括：

在以便表達所述一種或多種融合蛋白和裂解所述白蛋白基因的條件下，向所述細胞中引入包含至少一種編碼根據權利要求1所述的至少一種融合蛋白的多核苷酸或至少一種根據權利要求2所述的多核苷酸的一種或多種表達載體。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述多核苷酸包含腺相關病毒(AAV)載體。

9.根據權利要求7或權利要求8所述的方法，其中所述細胞是肝細胞。

10.一種用于修飾哺乳動物對象的細胞中的白蛋白基因的組合物，所述組合物包含一種或多種非天然存在的融合蛋白，其包含與內源白蛋白基因結合的鋅指蛋白DNA-結合結構域或TALE DNA-結合結構域和內切核酸酶裂解結構域，其中所述鋅指蛋白包含4、5或6個含識別螺旋區的鋅指結構域，其中所述鋅指蛋白包含在表1、表3、表5或表8的單行中示出的識別螺旋區，或其中TALE DNA-結合結構域結合在表12的單行中示出的序列，并且另外其中所述融合蛋白裂解所述內源白蛋白基因。

11.根據權利要求10所述的組合物，其中所述修飾選自插入、缺失、取代及其組合。

12.根據權利要求10或權利要求11所述的組合物，還包含外源序列，其被引入所述白蛋白基因。

13.根據權利要求10-12中任一項所述的組合物，其特征在于所述組合物修飾所述對象的一個或多個細胞中的內源白蛋白基因。

14.根據權利要求10-13中任一項所述的組合物，其中所述對象患有選自下組的疾病或病癥：凝血障礙，A1AT缺乏癥如CPD或肝損傷，溶酶體貯積病，代謝疾病，糖尿病，大皰性表皮松解，肝硬化，脂蛋白脂酶缺乏癥，癌癥和自身免疫性疾病。