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[發明專利]人VASN蛋白抗原表位、抗原模擬表位及其用途有效

專利信息
申請號: 201810144896.9 申請日: 2018-02-12
公開(公告)號: CN110156887B 公開(公告)日: 2023-01-13
發明(設計)人: 邵寧生;董潔;李少華;丁紅梅;李慧;黃皚雪;李達;耿介;張坦;白琛俊 申請(專利權)人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
主分類號: C07K14/705 分類號: C07K14/705;C07K7/08;A61K39/00;A61P35/00
代理公司: 暫無信息 代理人: 暫無信息
地址: 100850*** 國省代碼: 北京;11
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摘要:
搜索關鍵詞: vasn 蛋白 抗原 模擬 及其 用途
【說明書】:

發明屬于分子生物學、免疫學和細胞生物學領域,涉及人VASN蛋白抗原表位及其制備方法和用途。通過噬菌體篩選技術,獲得兩條抗原表位肽VP1和VP2,其與VASN蛋白430?441位氨基酸序列具有高度同源性。進而,通過ELISA、競爭ELISA、Transwell、CCK?8等試驗,確定了表位肽VP1和VP2能夠拮抗VASN抗體抑制肝癌細胞遷移和增殖的功能。因此,VASN(430?441位)抗原表位及其抗原模擬表位在腫瘤抗體藥物和腫瘤疫苗的研發中具有良好的應用前景。

技術領域:

本發明涉及蛋白質工程、分子生物學、免疫學及細胞生物學領域,具體而言,本發明涉及人VASN蛋白(Vasorin)抗原表位及其制備方法和用途。

背景技術:

人VASN蛋白(Vasorin),又稱Slit-Like2(SLITL2)蛋白,屬于典型的I型跨膜糖蛋白,其胞外結構域經去整合素-金屬蛋白酶17(a disintegrin and metalloprotease 17,ADAM17)剪切、脫落,成為可溶性形式。人VASN蛋白在主動脈的血管平滑肌細胞有較高水平的表達,在腎臟、胎盤組織也有表達,其它組織則表達水平低[Ikeda Y,et al.(2004)PNAS101(29):10732-10737]。而已有研究表明,乳腺癌細胞高表達VASN蛋白[J Malapeira,etal.(2010)Oncogene,30:1912-1922]。Westcott等人發現VASN等基因高表達,可以促進乳腺癌細胞的侵襲;進而利用基因芯片檢測三陰乳腺癌患者腫瘤組織樣品,結果顯示,高表達VASN等基因的患者預后差[Westcott JM,et al.(2015)J Clin Invest 125(5):1927-43]。Malapeira J等人研究結果顯示,可溶性VASN(soluble VASN,sVASN)蛋白可以結合TGF-β,抑制其介導的上皮-間質轉化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)[MalapeiraJ,et al.(2011)Oncogene 30(16):1912-22]。Li等人研究表明,肝癌細胞、肝癌組織中異常高表達VASN;人肝細胞L02過表達VASN蛋白,能夠促進其增值與遷移;敲低人肝癌細胞HepG2的VASN,則促進其凋亡、抑制其遷移[Li S,et al.(2015)Oncotarget 6(12):10045-59]。此外,人肝癌細胞HepG2培養上清的外泌體中VASN蛋白水平明顯高于正常肝細胞L02外泌體中的VASN。HepG2細胞來源的外泌體VASN蛋白可以轉運至人臍靜脈內皮細胞(HumanUmbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)中,促進HUVEC細胞的遷移[Huang A,et al.(2015)Int J Biol Sci 11(8):961-9]。上述研究結果提示,VASN可能通過促進腫瘤細胞生長和腫瘤血管形成,參與腫瘤的發生發展過程。

抗原表位作為激發特異性免疫應答的物質基礎,對于免疫反應的相關研究具有重要意義。蛋白質間相互作用是通過其表面關鍵氨基酸殘基組成的相互作用位點即功能結構域(domain)發生物理上的接觸來實現的。這些關鍵位點的獲得不僅可以加深對分子識別過程的認識,而且有利于深入了解信號傳導通路的生物學機制,對合理化藥物設計也具有重要價值。模擬表位(mimotope),通常指能夠模擬抗原表位的多肽結構,它具有與天然抗原相似的反應原性,與適當的載體偶聯后,還可能具有相似的免疫原性,(但在天然抗原中可能并無與之相同或相似的序列)[Deroo S,et al.(2001)Comb Chem High ThroughputScreen 4(1):75-110]。對于一些難以獲得或尚不確定的抗原,人們很難甚至無法確定其抗原表位,而通過獲得“模擬表位”,便有可能解決上述問題,尤其推動了構象型表位和非蛋白抗原表位的研究。“模擬表位”概念的出現,不僅為抗原表位的分析、疫苗研發開辟了一條新的思路,而且也為蛋白間相互作用研究提供了線索。

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