[發(fā)明專利]人VASN蛋白抗原表位、抗原模擬表位及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810144896.9
• 申請日: 2018-02-12
• 公開（公告）號: CN110156887B
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵寧生;董潔;李少華;丁紅梅;李慧;黃皚雪;李達(dá);耿介;張?zhí)?/a>;白琛俊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C07K7/08;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，涉及人VASN蛋白抗原表位及其制備方法和用途。通過噬菌體篩選技術(shù)，獲得兩條抗原表位肽VP1和VP2，其與VASN蛋白430?441位氨基酸序列具有高度同源性。進(jìn)而，通過ELISA、競爭ELISA、Transwell、CCK?8等試驗，確定了表位肽VP1和VP2能夠拮抗VASN抗體抑制肝癌細(xì)胞遷移和增殖的功能。因此，VASN(430?441位)抗原表位及其抗原模擬表位在腫瘤抗體藥物和腫瘤疫苗的研發(fā)中具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)工程、分子生物學(xué)、免疫學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及人VASN蛋白(Vasorin)抗原表位及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

人VASN蛋白(Vasorin)，又稱Slit-Like2(SLITL2)蛋白，屬于典型的I型跨膜糖蛋白，其胞外結(jié)構(gòu)域經(jīng)去整合素-金屬蛋白酶17(a disintegrin and metalloprotease 17，ADAM17)剪切、脫落，成為可溶性形式。人VASN蛋白在主動脈的血管平滑肌細(xì)胞有較高水平的表達(dá)，在腎臟、胎盤組織也有表達(dá)，其它組織則表達(dá)水平低[Ikeda Y，et al.(2004)PNAS101(29)：10732-10737]。而已有研究表明，乳腺癌細(xì)胞高表達(dá)VASN蛋白[J Malapeira，etal.(2010)Oncogene，30：1912-1922]。Westcott等人發(fā)現(xiàn)VASN等基因高表達(dá)，可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲；進(jìn)而利用基因芯片檢測三陰乳腺癌患者腫瘤組織樣品，結(jié)果顯示，高表達(dá)VASN等基因的患者預(yù)后差[Westcott JM，et al.(2015)J Clin Invest 125(5)：1927-43]。Malapeira J等人研究結(jié)果顯示，可溶性VASN(soluble VASN，sVASN)蛋白可以結(jié)合TGF-β，抑制其介導(dǎo)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)[MalapeiraJ，et al.(2011)Oncogene 30(16)：1912-22]。Li等人研究表明，肝癌細(xì)胞、肝癌組織中異常高表達(dá)VASN；人肝細(xì)胞L02過表達(dá)VASN蛋白，能夠促進(jìn)其增值與遷移；敲低人肝癌細(xì)胞HepG2的VASN，則促進(jìn)其凋亡、抑制其遷移[Li S，et al.(2015)Oncotarget 6(12)：10045-59]。此外，人肝癌細(xì)胞HepG2培養(yǎng)上清的外泌體中VASN蛋白水平明顯高于正常肝細(xì)胞L02外泌體中的VASN。HepG2細(xì)胞來源的外泌體VASN蛋白可以轉(zhuǎn)運至人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HumanUmbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC)中，促進(jìn)HUVEC細(xì)胞的遷移[Huang A，et al.(2015)Int J Biol Sci 11(8)：961-9]。上述研究結(jié)果提示，VASN可能通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長和腫瘤血管形成，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。

抗原表位作為激發(fā)特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)基礎(chǔ)，對于免疫反應(yīng)的相關(guān)研究具有重要意義。蛋白質(zhì)間相互作用是通過其表面關(guān)鍵氨基酸殘基組成的相互作用位點即功能結(jié)構(gòu)域(domain)發(fā)生物理上的接觸來實現(xiàn)的。這些關(guān)鍵位點的獲得不僅可以加深對分子識別過程的認(rèn)識，而且有利于深入了解信號傳導(dǎo)通路的生物學(xué)機制，對合理化藥物設(shè)計也具有重要價值。模擬表位(mimotope)，通常指能夠模擬抗原表位的多肽結(jié)構(gòu)，它具有與天然抗原相似的反應(yīng)原性，與適當(dāng)?shù)妮d體偶聯(lián)后，還可能具有相似的免疫原性，(但在天然抗原中可能并無與之相同或相似的序列)[Deroo S，et al.(2001)Comb Chem High ThroughputScreen 4(1)：75-110]。對于一些難以獲得或尚不確定的抗原，人們很難甚至無法確定其抗原表位，而通過獲得“模擬表位”，便有可能解決上述問題，尤其推動了構(gòu)象型表位和非蛋白抗原表位的研究。“模擬表位”概念的出現(xiàn)，不僅為抗原表位的分析、疫苗研發(fā)開辟了一條新的思路，而且也為蛋白間相互作用研究提供了線索。