[發(fā)明專利]甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體及編碼基因、表達(dá)載體和菌株與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810143543.7
• 申請(qǐng)日: 2018-02-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108330117A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾世超;詹志春;周櫻;諶頡;張成杰;吳啟濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢新華揚(yáng)生物股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/16
• 分類號(hào): C12N9/16;C12N15/57;C12N15/81;C12N1/19;A23L5/20;A62D3/02
• 代理公司: 北京超凡志成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進(jìn)

本發(fā)明提供了甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體及編碼基因、表達(dá)載體和菌株與應(yīng)用，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過(guò)對(duì)甲基對(duì)硫磷酸水解酶中L83，G119，G82，V118位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變，獲得系列催化效率提高的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體，提高了對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的降解能力，具有好的工業(yè)應(yīng)用前景和社會(huì)及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體及編碼基因、表達(dá)載體和菌株與應(yīng)用。

背景技術(shù)

有機(jī)磷化合物如對(duì)硫磷和甲基對(duì)硫磷是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶的強(qiáng)烈抑制劑，其攝入會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)功能的逐步喪失，甚至導(dǎo)致死亡，是一類高毒的化合物。但這類化合物在世界范圍內(nèi)仍然被廣泛用來(lái)控制農(nóng)業(yè)蟲(chóng)害。食品和環(huán)境中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留給人類的生命健康造成了巨大的威脅。

有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶可以高效的水解有機(jī)磷農(nóng)藥，生成低毒的小分子化合物，本身無(wú)毒無(wú)害，為解決食品和環(huán)境中農(nóng)藥殘留問(wèn)題提供了一條安全綠色的途徑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體，該甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體具有較好的有機(jī)磷化合物水解能力，能夠應(yīng)用于環(huán)境污染治理中。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體的編碼基因，該編碼基因能編碼上述的用于降解有機(jī)磷化合物的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體。

本發(fā)明的第三目的在于提供含有上述的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體的編碼基因的表達(dá)載體。

本發(fā)明的第四目的在于提供含有上述甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體的編碼基因的重組菌。

本發(fā)明的第五目的在于提供上述的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體在有機(jī)磷化合物降解中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第六目的在于提供上述的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體的編碼基因在有機(jī)磷化合物降解中的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，采用以下技術(shù)方案：

甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體，與SEQ ID NO.1所示的序列相比，甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體具有對(duì)應(yīng)SEQ ID NO.1所示的序列的第83位突變L83C、第119位突變G119C、第82位突變G82Q和第118位突變V118A中的至少一種。

一種甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體的編碼基因，甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體的編碼基因編碼上述的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體。

含有上述的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體的編碼基因的表達(dá)載體。

含有上述的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體的編碼基因的重組菌。

上述的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體在有機(jī)磷化合物降解中的應(yīng)用。

上述的甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體的編碼基因在有機(jī)磷化合物降解中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明通過(guò)提供甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體具有較高的酶活力，通過(guò)甲基對(duì)硫磷酸水解酶突變體較好的酶活，提高了對(duì)有機(jī)磷化合物的降解能力，不同的突變類型的酶活力具有不同程度的提高，具有好的工業(yè)應(yīng)用前景和社會(huì)及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例提供的野生型MPH的產(chǎn)酶能力時(shí)間誘導(dǎo)曲線圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例提供的突變型MPH產(chǎn)酶能力時(shí)間誘導(dǎo)曲線圖。

具體實(shí)施方式