[發明專利]一種融合蛋白、試劑盒以及CHIP-seq檢測方法有效
| 申請號： | 201810142875.3 | 申請日： | 2018-02-11 |
| 公開（公告）號： | CN108285494B | 公開（公告）日： | 2021-09-07 |
| 發明（設計）人： | 何愛彬;艾珊珊;羅穎潔 | 申請（專利權）人： | 北京大學 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N9/12;C12Q1/6804;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 吳嘯寰 |
| 地址： | 100000*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 融合 蛋白 試劑盒 以及 chip seq 檢測 方法 | ||
1.一種CHIP-seq檢測方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
將樣品先后分別與抗體和融合蛋白孵育，激活所述融合蛋白進行切割反應，切割反應終止后提取DNA，進行測序；
所述融合蛋白包括Tn5轉座酶和Fc結合蛋白，所述Fc結合蛋白選自蛋白A或蛋白G；
所述樣品為組織切片、細胞爬片或細胞涂片，所述CHIP-Seq為原位CHIP-seq；
所述樣品與所述融合蛋白的孵育條件為：在2～10℃下孵育30min～12h；
所述切割反應的具體條件為：在2～10℃下反應30min～12h；或者在25～37℃下反應5min～12h。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品在與抗體孵育前進行交聯反應或者不進行交聯反應。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述原位CHIP-seq是指從抗體孵育到切割反應終止均在所述組織切片、細胞爬片或細胞涂片上完成。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述原位CHIP-seq還包括在切割反應終止后，在所述組織切片、細胞爬片或細胞涂片上對切割得到的目的片段進行PCR擴增。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，用于擴增的引物為Nextera index引物，聚合酶為等溫DNA聚合酶，擴增結束后，洗脫并純化擴增所得DNA，用于建庫和測序。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，聚合酶為Phi29 DNA聚合酶。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品與所述抗體的孵育條件為：在2～10℃下孵育30min～12h。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品與所述抗體的孵育條件為：在4℃下孵育30min～4h。
9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品與所述融合蛋白的孵育條件為：在4℃下孵育30min～4h。
10.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述切割反應的具體條件為：在4℃下反應30min～4h；或者在30℃下反應15min-2h。
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