[發明專利]腸道病毒分型鑒定用引物探針和鑒定方法

有效

• 申請號: 201810141481.6
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108424977B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 朱兆奎;李曉丹;趙百慧
• 申請（專利權）人: 上海伯杰醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251
• 代理人: 林曉青

1.一種rRT-PCR引物和探針組合，其特征在于，包括針對腸道病毒中A組、B組和C組所有血清型的VP1基因保守區域設計的序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2所示的引物對和序列如SEQ ID No.3所示的探針，針對柯薩奇病毒A組16型的VP1基因保守區域設計的序列如SEQID No.4、SEQ ID No.5所示的引物對和序列如SEQ ID No.6所示的探針，以及針對腸道病毒71型的VP1基因保守區域設計的序列如SEQ ID No.7、SEQ ID No.8所示的引物對和序列如SEQ ID No.9所示的探針。

2.根據權利要求1所述的rRT-PCR引物和探針組合，其特征在于，針對腸道病毒中A組、B組和C組所有血清型的探針兩端的標記分別為FAM和BHQ1標記；針對柯薩奇病毒A組16型的探針兩端的標記分別為HEX和BHQ1標記；針對腸道病毒71型兩端的標記分別為CY5和BHQ1標記。

3.一種腸道病毒分型鑒定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如權利要求1或2所述的rRT-PCR引物和探針組合。

4.如權利要求3所述的腸道病毒分型鑒定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒用于：

鑒定或輔助鑒定待測病毒為腸道病毒，并鑒定該腸道病毒是CA16血清型或EV71血清型；

或鑒定待測樣本是否感染腸道病毒；如是，鑒定該腸道病毒是CA16血清型或EV71血清型。

5.一種如權利要求1或2所述的rRT-PCR引物和探針組合的應用，其特征在于，包括：

或制備用于鑒定或輔助鑒定待測病毒為CA16血清型或EV71血清型腸道病毒的試劑盒；

或制備用于鑒定待測樣本是否感染了CA16血清型或EV71血清型腸道病毒的試劑盒。

6.一種非診斷目的的應用如權利要求1或2所述的rRT-PCR引物和探針組合進行腸道病毒分型鑒定的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

S1、利用核酸提取試劑從待測腸道病毒樣本中提取RNA；

S2、加入所述引物和探針組合進行一步法rRT-PCR核酸擴增反應，其中引物終濃度為400nM,探針終濃度為100nM；

S3、根據Ct值判斷是否是腸道病毒陽性，并根據陽性結果熒光標記的不同判斷是CA16血清型還是EV71血清型。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟S3中，Ct值小于38的判斷為陽性。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟S3中，FAM通道陽性的可判斷鑒定結果為腸道病毒陽性；HEX通道陽性的可判斷分型結果為腸道病毒CA16陽性，CY5通道陽性判斷分型結果為EV71陽性。

9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述一步法rRT-PCR核酸擴增反應的反應條件為：45℃，10分鐘，1個循環；95℃，2分鐘，1個循環；95℃，5秒，60℃，20秒，40個循環。