[發明專利]一種檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒及其定量檢測方法

在審

• 申請號: 201810141217.2
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108303550A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 夏宣喜;賴華;鄧曉俠;孔浩杰
• 申請（專利權）人: 廣東優尼德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國;徐進之

1.一種檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒，其特征在于，包括脂聯素層析器、樣本稀釋液、洗滌液及膠體金標記脂聯素抗體，所述脂聯素層析器包括盒體、盒蓋、吸水墊及硝酸纖維素膜，所述盒體具有一開口朝上的容置腔，所述吸水墊設置于所述容置腔內，所述硝酸纖維素膜設置于所述容置腔內且位于所述吸水墊的上方，所述盒蓋蓋設于所述盒體的開口端，所述盒蓋開設有貫穿所述盒蓋的上下表面的反應孔，以露出部分所述硝酸纖維素膜；其中，所述硝酸纖維素膜上包被有脂聯素抗體。

2.如權利要求1所述的檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒，其特征在于，所述盒蓋的下表面向下凸設有位于所述反應孔外緣的導流圈，所述導流圈自上而下呈漸縮設置。

3.如權利要求2所述的檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒，其特征在于，所述導流圈的上端緣的直徑為0.6cm，所述導流圈的下端緣的直徑為0.3cm。

4.如權利要求1所述的檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒，其特征在于，所述盒體的容置腔內設有安裝槽，所述吸水墊與所述硝酸限位素膜均設置于所述安裝槽內。

5.如權利要求1所述的檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒，其特征在于，所述盒蓋的邊緣向下延伸而形成周壁，所述周壁的內壁面沿周向設置有環形凸緣，所述盒體的外壁面凹陷形成與所述環形凸緣適配的環形卡槽。

6.如權利要求5所述的檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒，其特征在于，所述盒蓋的上表面凹陷形成容置槽，所述容置槽環設于所述反應孔的外圍。

7.如權利要求1所述的檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒，其特征在于，所述樣本稀釋液為含有1％Triton-100的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液；所述洗滌液為含有0.7％牛血清白蛋白的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液。

8.如權利要求1所述的檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒，其特征在于，所述膠體金標記脂聯素抗體按如下步驟制備：

將質量分數為1％氯金酸與雙蒸水按體積比1∶79配成A液；將質量分數為1％檸檬酸三鈉、質量分數為1％鞣酸、25mM K₂CO₃與雙蒸水按體積比4∶0.035～0.080∶0.035～0.080∶15.84～15.93配成B液；再將所述A液和所述B液在水浴內同時加熱到59～61℃，攪拌A液，快速加入B液，繼續攪拌1分鐘，在10～13分鐘內加熱至沸騰，得到膠體金液；

利用0.25M K₂CO₃調整所述膠體金液的pH值為6.8～7.1；

將人血清白蛋白標記抗體原液在4℃下6000～13000r/min離心60分鐘，吸取上清液；將所述上清液裝入透析袋，用雙蒸水透析去除鹽分后，裝瓶冷凍，得到脂聯素抗體；

將0.27～0.30mg脂聯素抗體緩慢加入100ml膠體金液中進行標記，攪拌15分鐘后，依次加入10％迭氮鈉500μl和1％牛血清白蛋白100μl，攪勻后在2.5～4.0℃，6000r/min條件下離心30分鐘，去除上清液，沉淀物即為膠體金標記脂聯素抗體。

9.一種檢測脂聯素的斑點金滲濾試劑盒的定量檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

采集血樣5～10ml，室溫放置15min-120min，以3000r/min速度離心30min，吸取上清液至樣本稀釋液中混勻，即得待測樣本；

利用移液器準確吸取25μL待測樣本，滴加在脂聯素層析器的反應孔內硝酸纖維素膜上；

待測樣本完全滲入后，再向脂聯素層析器的反應孔內硝酸纖維素膜上滴加25uL膠體金標記脂聯素抗體；

待膠體金標記脂聯素抗體完全滲入后，再向脂聯素層析器的反應孔內硝酸纖維素膜上滴加25μL洗滌液；

待洗滌液完全滲入后，檢測脂聯素層析器的信號值，通過儀器結合定標卡信息計算待測樣本的脂聯素濃度，定量判定其質量濃度。