[發(fā)明專利]一種促進(jìn)干細(xì)胞擴(kuò)增及干性維持的膠原材料及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810140830.2
• 申請(qǐng)日: 2018-02-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110144321A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戴建武;趙燕南;陳冰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;何葉喧

本發(fā)明公開(kāi)了一種促進(jìn)干細(xì)胞擴(kuò)增及干性維持的膠原材料及其制備方法。本發(fā)明首先提供了一種膠原材料的制備方法，包括如下步驟：(1)取牛筋膜組織，去除表面的肌肉和脂肪，用水清洗；(2)置于含磷酸三丁酯的液體中浸泡；(3)置于水中浸泡并清洗；(4)置于NaCl溶液中浸泡；(5)置于水中浸泡并清洗；(6)置于表面活性劑溶液中浸泡；(7)置于水中浸泡并清洗；(8)置于NaOH溶液中浸泡；(9)置于水中浸泡并清洗；(10)進(jìn)行冷凍干燥；(11)溶于醋酸溶液；(12)透析；(13)進(jìn)行冷凍干燥，得到膠原材料。本發(fā)明還保護(hù)以上膠原材料在培養(yǎng)干細(xì)胞中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的膠原材料對(duì)于干細(xì)胞培養(yǎng)具有重大的應(yīng)用推廣價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種促進(jìn)干細(xì)胞擴(kuò)增及干性維持的膠原材料及其制備方法。

背景技術(shù)

外源干細(xì)胞移植是組織損傷修復(fù)的重要手段，干細(xì)胞具有自我更新和分化能力，可以分化為特定類型的組織細(xì)胞，促進(jìn)組織再生，同時(shí)干細(xì)胞也可以通過(guò)旁分泌作用改善損傷微環(huán)境，促進(jìn)損傷修復(fù)。但是干細(xì)胞在體外擴(kuò)增培養(yǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞增殖分裂時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的干性會(huì)逐漸降低。因此，如何建立一種能促進(jìn)干細(xì)胞擴(kuò)增且保持?jǐn)U增后干細(xì)胞特性的培養(yǎng)方法對(duì)組織損傷修復(fù)至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種促進(jìn)干細(xì)胞擴(kuò)增及干性維持的膠原材料及其制備方法。

本發(fā)明首先提供了一種膠原材料的制備方法，包括如下步驟：

(1)取牛筋膜組織，去除表面的肌肉和脂肪，用水清洗；

(2)取完成步驟(1)的組織，置于含磷酸三丁酯的液體中浸泡；

(3)取完成步驟(2)的組織，置于水中浸泡并清洗；

(4)取完成步驟(3)的組織，置于NaCl溶液中浸泡；

(5)取完成步驟(4)的組織，置于水中浸泡并清洗；

(6)取完成步驟(5)的組織，置于表面活性劑溶液中浸泡；

(7)取完成步驟(6)的組織，置于水中浸泡并清洗；

(8)取完成步驟(7)的組織，置于NaOH溶液中浸泡；

(9)取完成步驟(8)的組織，置于水中浸泡并清洗；

(10)取完成步驟(9)的組織，進(jìn)行冷凍干燥，得到干燥組織；

(11)取步驟(10)得到的干燥組織，溶于醋酸溶液，然后將體系pH調(diào)至6-8；

(12)將完成步驟(11)的整個(gè)體系轉(zhuǎn)移到透析袋在水中進(jìn)行透析；

(13)完成步驟(12)后，收集透析袋內(nèi)的整個(gè)體系，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到干粉，即為干粉狀膠原材料。

步驟(1)中，所述水為去離子水。

步驟(2)中，含磷酸三丁酯的液體是將磷酸三丁酯和水混合得到的。步驟(2)中，磷酸三丁酯的濃度可為0.5g/100ml-1.5g/100ml，具體可為1g/100ml。步驟(2)中，浸泡的溫度可為2℃-16℃，具體可為4℃。步驟(2)中，浸泡的時(shí)間可為18小時(shí)-72小時(shí)，具體可為48小時(shí)。

步驟(3)中，所述水為去離子水。步驟(3)中，浸泡溫度可為2℃-16℃，具體可為4℃。步驟(3)中，浸泡并清洗可為“每5分鐘-15分鐘換水，共換水10次-20次”，具體可為“每10分鐘換水，共換水15次，最后一次換水10分鐘后完成本步驟”。